實(shí)驗(yàn)操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動(dòng)物。

b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。

c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周?chē)陌?，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    乳腺管癌細(xì)胞：T-47D 

別稱T-47-D; T47-D; T47D:A; T47D

種屬人類

年齡（性別）女性，54歲

組織來(lái)源乳腺；乳房；導(dǎo)管；來(lái)自導(dǎo)管癌肋膜滲出液轉(zhuǎn)移灶

生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

背景描述T-47細(xì)胞分離自一位54歲乳房侵入性導(dǎo)管癌的女性患者胸水；發(fā)現(xiàn)分化的上皮亞株(T-47D)有細(xì)胞質(zhì)連接和17-β-雌二醇及其他類固醇降血鈣素的受體，T-47D細(xì)胞表達(dá)WNT7B癌基因。

生物安全等級(jí)1

生長(zhǎng)培養(yǎng)基RPMI-1640＋0.2U/ml Insulin＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例1:2-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

倍增時(shí)間~36-46小時(shí)

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性Yes, forms colonies in soft agar.

受體表達(dá)情況calcitonin, expressed; androgen receptor, expressed; estrogen receptor, expressed; progesterone receptor, expressed; glucocorticoid receptor, positive, expressed; prolactin, expressed; calcitonin; androgen receptor, positive; progesterone receptor, p

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問(wèn)題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無(wú)菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

人 PPP2R3B 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

人 UBD 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

人 CALM2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

人 TXNL4A 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

人 FKBP2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

人 C1D 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

人 IFITM3 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

人 AP2B1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

人 C6 基因全長(zhǎng)ORF克隆 

乳腺管癌細(xì)胞：T-47D Mucin 4/Muc4  粘蛋白-4抗體 0.1ml

phospho-A Raf(Ser214)  磷酸化A-Raf抗體 規(guī)格: 0.1ml

IGSF5  免疫球蛋白超家族成員5抗體 規(guī)格: 0.2ml

50 μl Lyso-Tracker Red（溶體紅色熒光探針） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

2 ug pPIC 6C pPIC 6C 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

可溶性焦鐵 Of soluble iron pyrophosphate 0.025/支*5

25g L-  L-Arginine 室溫保存

250mL Citrate Buffer（檸檬酸鹽緩沖液）,0.5M,pH7.0   Citrate Buffer,0.5M,pH7.0   常溫保存

鼠李糖發(fā)酵管  20支

2 ug pLVX-CMV pLVX-CMV 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

250mL Triton Permeating Solution in TBS,10X  Triton Permeating Solution in TBS,10X  常溫保存

1張 硝酸纖維素膜，13×20 cm（Amersham） Nitrocellulose Membrane 常溫