細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    黑色素瘤細(xì)胞：A875(A-875)

種屬人類

年齡（性別）40歲

組織來源未知

生長特性貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)多角形

背景描述A875細(xì)胞NGF受體陽性，可用于建立動物研究模型。

生長培養(yǎng)基MEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

實(shí)驗(yàn)操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

人 CD140b / PDGFRb 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽

人 LEP R 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽

小鼠 CCL2 / MCP-1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

人 IL23R 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

小鼠 EIF2C2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

人 MMP-9 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽

人 ALK-1 / ACVRL1 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆

黑色素瘤細(xì)胞：A875(A-875)CREG2  E1A激活基因刺激蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Elastin  彈性蛋白α抗體 規(guī)格: 0.1ml

IL-18R Beta/IL1R7/CD218b  白細(xì)胞介素-18受體β鏈抗體 規(guī)格: 0.2ml

ChRM2  毒蕈堿型乙酰受體M2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-PKM2 (Tyr105)  磷酸化丙酮酸激M2抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-B-Raf (Thr597)  磷酸化B-Raf抗體 規(guī)格: 0.1ml

2 ug pNTAP- B pNTAP- B 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

MEK6  絲裂原活化蛋白激MKK6抗體 規(guī)格: 0.1ml

CXCL10  CXCL10趨化因子10/干擾素誘導(dǎo)蛋白10抗體 規(guī)格: 0.1ml

1瓶 A-427細(xì)胞株 A-427 低溫運(yùn)輸和保存

500mL Tris-HCl Buffer,1.0M,pH7.4   Tris-HCl Buffer,1.0M,pH7.4   常溫保存

10mL 長效期SDS-PAGE還原劑 SDS-PAGE Reducing Agent 4℃保存

500mL Tris-HCl Buffer,1.0M,pH9.0  Tris-HCl Buffer,1.0M,pH9.0  常溫保存