實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產品屬性：

產品介紹：

名稱    乳腺癌高轉移細胞：MDA-MB-435 

別稱MDA-MB435; MDAMB435; MDA.MB.435; MDA-435; MDA 435; MDA435; MD Anderson-Metastatic Breast-435

年齡（性別）女；48歲

生長特性貼壁細胞

細胞形態(tài)上皮細胞樣

背景描述MDA-MB-435細胞是于1976年建系，源自一位48歲患有乳腺癌女性的胸腔積液。但近來證明MDA-MB-435細胞被M14黑色素瘤細胞污染。

生長培養(yǎng)基Leibovitz's L-15＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

倍增時間~26-38 hours

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，100%

溫度：37℃

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯(lián)系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養(yǎng)箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3. 預熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

人 CA XII 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽

人 ALK-3 / BMPRIA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 MDK / NEGF2 轉錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

人 MTOR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

小鼠 DLL1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽

人 ETS1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 ST6GAL1 轉錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽

人 PKM

乳腺癌高轉移細胞：MDA-MB-435 含糖牛肉湯培養(yǎng)基 Beef Broth Medium(with Sugar) 250g

2 ug pcDNA3.1/V5-His B pcDNA3.1/V5-His B 低溫運輸，-20℃保存

BETA-SSA瓊脂 BETA-SSA Agar 250g

CDK10  周期素依賴性激10 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-pig IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標記的兔抗豬IgG 規(guī)格: 0.1ml

500g 酵母浸膏 Yeast Extract   室溫避光干燥保存

100mL TES Buffer,0.2M,pH7.0  TES Buffer,0.2M,pH7.0  常溫保存

100mL Denhardt溶液，50×（非同位素用） Denhardt Solution, 50× -20℃保存

PBEF (CT)  內脂素/前B細胞克隆增強因子-2（C端抗體） 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit anti-MG IgG/HRP  辣根過氧化物標記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

ADAMTSL1  整合素樣金屬蛋白與凝樣1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlSOX4  核轉錄因子SOX4抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit anti-MG IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

HHV8/ORF50  人類皰疹毒8抗體 規(guī)格: 0.2ml