實(shí)驗(yàn)操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    小鼠背根神經(jīng)元細(xì)胞

2.組織來源：脊髓組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠背根神經(jīng)元細(xì)胞分離自脊椎背根神經(jīng)節(jié)；感覺神經(jīng)母細(xì)胞發(fā)出軸突，呈束狀，左右對稱地從神經(jīng)管的背部進(jìn)入，此時的脊神經(jīng)節(jié)即改稱為背根神經(jīng)節(jié)。神經(jīng)系統(tǒng)最基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是神經(jīng)元，即神經(jīng)細(xì)胞，其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體，內(nèi)含神經(jīng)絲、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示，在光鏡下是灰藍(lán)色斑塊狀，稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起，能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動，突起的大小和形態(tài)各不相同，很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。脊髓背根神經(jīng)節(jié)是周圍神經(jīng)的主要傳入神經(jīng)元，是感覺信號傳導(dǎo)的中繼站。背根神經(jīng)元細(xì)胞的獲取較為困難，需要在盡可能短的時間內(nèi)通過解剖顯微鏡獲得一定量的背根神經(jīng)節(jié)組織。神經(jīng)組織體外培養(yǎng)方法是當(dāng)代神經(jīng)科學(xué)一項(xiàng)很有價值的研究手段，背根神經(jīng)節(jié)富含周圍神經(jīng)系統(tǒng)感覺神經(jīng)元，已廣泛用于軸突的導(dǎo)向及再生、中樞及周圍神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘形成、神經(jīng)營養(yǎng)因子作用及受體分布、神經(jīng)細(xì)胞衰老機(jī)制、基因治療、組織工程等神經(jīng)科學(xué)的研究。

5.方法簡介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠背根神經(jīng)元細(xì)胞采用膠原酶&聯(lián)合消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠背根神經(jīng)元細(xì)胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-M166

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象。

5次 填入法DNA末端標(biāo)記試劑盒C Fill-in DNA End Labeling Kit -20℃保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Angiomotin

2 ug pGLuc basic pGLuc basic 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人雙特異性3(DUSP3)ELISA試劑盒

瓊脂培養(yǎng)基N Agar medium N (Cetrimide agar) 250g 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Hum?嵌?L?

小鼠背根神經(jīng)元細(xì)胞ZNF471  鋅指蛋白471抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-ERK5( Ser731+Thr733)  磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激5抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-IRS-2(Ser731)  磷酸化胰島素受體底物2抗體 規(guī)格: 0.1ml

1瓶 5637細(xì)胞株 5637 低溫運(yùn)輸和保存

麥康凱液體培養(yǎng)基（顆粒）  250g

5次 TdT加尾法DNA標(biāo)記試劑盒 TdT-Tailing DNA Labeling Kit Series -20℃保存

2 ug pCAMBIA1381Z pCAMBIA1381Z 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）顆粒 Potato Dextrose Agar 300ml/袋*10

25Inh.U α2巨球蛋白 α2-Macroglobulin -20℃保存

2 ug pIRES2-DsRed-Express pIRES2-DsRed-Express 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

沙氏BHI瓊脂 Sabouraud BHI Agar 250g

100U Red-Pfu DNA聚合  

50次 真菌DNAout Fungal DNAOUT 常溫