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貨號 | GOY-01X0276 |
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使用方法:
收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
公司細胞現(xiàn)貨供應,質(zhì)量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務,同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
產(chǎn)品名稱 | 高轉(zhuǎn)移肝癌細胞:HCCLM3 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0276 |
商品介紹:
名稱 高轉(zhuǎn)移肝癌細胞:HCCLM3 別稱LM3; MHCC-LM3; MHCCLM3 年齡(性別)39歲 組織來源肝;肝癌 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述HCCLM3細胞是一株由人肝癌細胞株MHCC97-H接種裸鼠、進行3次肺轉(zhuǎn)移篩選、取肺轉(zhuǎn)移瘤建成皮下接種后高度自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移的肝癌細胞系。HCCLM3細胞被廣泛用于人肝癌發(fā)病機理的基礎和臨床研究,也可用于抗腫瘤藥物篩選。 生長培養(yǎng)基DMEM+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~35-48 hours 凍存條件 凍存液:55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ |
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
小鼠 Neuropilin-1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 IL6ST 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
人 MSLN 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 TNFSF11 / CD254 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體), 帶FLAG標簽
人 GPNMB 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 LRPAP1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
人 IL2Rb / CD122 基因全長ORF克隆 (表達載體),
高轉(zhuǎn)移肝癌細胞:HCCLM3 ASB10 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族10抗體 0.1mlGoat Anti-rabbit IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的羊抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml
TSH 促甲狀素抗體 規(guī)格: 0.1ml
Ran/ARA24 雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體 規(guī)格: 0.2ml
NALP6 富含重復結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2ml
IL-12RB1/CD212 白細胞介素-12受體β1抗體 規(guī)格: 0.1ml
KMT3B/NSD1/ARA267 組蛋白甲基化KMT3B抗體(雄激素受體激活蛋白) 規(guī)格: 0.2mlphospho-Histone H1(Thr146) 磷酸化組蛋白H1抗體 規(guī)格: 0.1ml
RAB40C RAS基因家族蛋白RAB40C抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-STAT5a(Ser726) 磷酸化信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子5a抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-Rb (Thr821) 磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
ATRIP/TREX1 系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體 規(guī)格: 0.2ml
IGF II/IGF2 胰島素樣生因子-II抗體 規(guī)格: 0.1ml
SPATA12 睪特異表達新基因5抗體 規(guī)格: 0.1ml
2 ug pSUPER.puro pSUPER.puro 低溫運輸,-20℃保存
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