檢測程序：
1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4.  洗板：同前。
5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0分鐘。
6.  洗板：同前。
7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37℃暗處反應15 分鐘。
8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
9.  30分鐘內用酶標儀在450 nm處測吸光值。

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實驗流程:
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備；
2. 加樣（標準品及樣本）100µL，37°C孵育1小時；
3. 吸棄，加檢測溶液A100µL，37°C孵育1小時；
4. 洗板3次；
5. 加檢測溶液B100µL，37°C孵育30分鐘；
6. 洗板5次；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分鐘；
8. 加終止液50µL，立即450nm讀數(shù)。
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操作步驟：
1）運用前，將所有試劑充沛混勻。不要使液體發(fā)生很多的泡沫，防止加樣時參加很多的氣泡，發(fā)生加樣上的差錯。
2）依據(jù)待測樣品數(shù)量加上規(guī)范品的數(shù)量決議所需的板條數(shù)。每個規(guī)范品和空白孔主張做復孔。每個樣品依據(jù)自個的數(shù)量來定，能運用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后參加50ul于反響孔內。
3）參加稀釋好后的規(guī)范品50ul于反響孔、參加待測樣品50ul于反響孔內。當即參加50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，悄悄振動混勻，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內液體，每孔加滿洗刷液，振動30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷，洗刷次數(shù)添加一次。
5）每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP，悄悄振動混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內液體，每孔加滿洗刷液，振動30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷，洗刷次數(shù)添加一次。
7）每孔參加底物A、B各50ul，悄悄振動混勻，37℃溫育10分鐘。防止光照。
8）取出酶標板，敏捷參加50ul停止液，參加停止液后應當即測定成果。
9）在450nm波利益測定各孔的OD值。
樣品收集、處理及保存：
1）.細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
2）細胞：用PBS反復洗滌細胞3次，調整細胞濃度達到104-106/ml 左右，通過反復凍融，使細胞破壞并放出細胞內成份，或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。
3）血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。
4）血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
5）體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
6.）組織標本：切取組織標本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進行檢測。
樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
7）保存：如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-70 ℃保存，避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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Aspergillus│niger分離基物: 檸檬酸果提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 甘蔗廢糖蜜深層發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸。培養(yǎng)基: CM0085生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

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