實(shí)驗(yàn)操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動(dòng)物。

b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。

c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周?chē)陌?，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱(chēng)    小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞：P815 

別稱(chēng)P-815; P 815

種屬小鼠

年齡（性別）不詳

組織來(lái)源肥大細(xì)胞；肥大細(xì)胞瘤

生長(zhǎng)特性半貼半懸

細(xì)胞形態(tài)肥大細(xì)胞

背景描述P815細(xì)胞源自DBA/2小鼠的肥大細(xì)胞瘤；P815細(xì)胞可吞噬乳膠微球，但不吞噬酵母聚糖或卡介苗；P815細(xì)胞沒(méi)有抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。硫酸右旋糖酐、LPS或PPD不能抑制P815細(xì)胞生長(zhǎng)；P815細(xì)胞產(chǎn)生，鼠痘病毒陰性。

生物安全等級(jí)1

生長(zhǎng)培養(yǎng)基DMEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例2×10^5cells/mL

推薦換液頻率2~3次/周

倍增時(shí)間~18-22小時(shí)

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

基因表達(dá)情況lysozyme

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問(wèn)題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無(wú)菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以?xún)?yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

小鼠 IFNB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

小鼠 IFNB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

小鼠 LTA 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

小鼠 XCL1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

小鼠 XCL1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

小鼠 GSK3B 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

小鼠 GSK3B 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

小鼠 SDC1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)

小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞：P815 SOB培養(yǎng)基 SOB Medium 250g

5mL 內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

50T 乙型肝炎病毒基因分型PCR測(cè)定試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

牛奶培養(yǎng)基  250g

5次 一步法97孔板單菌落質(zhì)粒DNAout（離心法） One-Step 96 Microwell Plate Colony Plasmid DNAOUT 常溫

MPO/c-ANCA  髓過(guò)氧化物抗體 規(guī)格: 0.1ml

3%NaCl  20支

液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基顆粒 Thioglycollate Medium 300ml/袋*10

Phospho-PLCG2(Tyr1217)  磷酸化磷酯Cγ2抗體 規(guī)格: 0.1mlANGEL2  ANGEL2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

APC5  細(xì)胞分裂周期蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2mlFAM98B  FAM98B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Cofilin(Ser3)  磷酸化絲切蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

MMP-17  基質(zhì)金屬蛋白-17抗體 規(guī)格: 0.1ml