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Rosetta-gami 2(DE3) 100ul*10說(shuō)明書

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更新時(shí)間:2019-03-10 15:47:56瀏覽次數(shù):205次

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elisa檢測(cè)試劑盒
ATCC細(xì)胞
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生化試劑
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科研細(xì)胞
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適用領(lǐng)域 其他
Rosetta-gami 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10說(shuō)明書取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的SOC或LB平板,37℃倒置培養(yǎng)12-16小時(shí)。涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整,如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取100ul左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300ul的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。

使用說(shuō)明:
1. Rosetta-gami 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10說(shuō)明書取100 μl感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中融化。
2.待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30min。
3. 42℃熱擊45sec,然后快速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3min,該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
4.每個(gè)離心管中加入450 μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床, 150 rpm振蕩培養(yǎng)45~60min使菌體復(fù)蘇。
5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12~16h。


培養(yǎng)方法:
Rosetta-gami 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10說(shuō)明書收到細(xì)胞后,在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況,如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)又要開始了,科研工作者又該忙碌了,大家可能都在尋找適合自己的細(xì)胞,不用急,我們幫您掌舵,讓您滿意!
傳代方法:細(xì)胞*匯合時(shí),倒掉舊液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,顯微鏡下觀察細(xì)胞*脫離瓶壁分離成單個(gè)細(xì)胞后棄掉胰酶,加培養(yǎng)基混勻分瓶,T25瓶中加培養(yǎng)基至6-8ml,T75瓶加培養(yǎng)基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培養(yǎng)。

ELISA Kit for Human High mobility group protein B1

96T0.78-50 ng/mL高香草酸(Homovanillic acid)ELISA試劑盒通用

ELISA Kit for Homovanillic acid

96T7.8-500 ng/mL組織胺(Histamine)ELISA試劑盒通用

ELISA Kit for Histamine

96T0.156-10 ng/mL羥賴氨酸(Hydroxylysine)ELISA試劑盒通用

ELISA Kit for Hydroxylysine

96T0.78-50 nmol/L同型半胱氨酸(Homocysteine)ELISA試劑盒通用

ELISA Kit for Homocysteine

96T62.5-4000 nmol/L羥脯氨酸(Hydroxyproline)ELISA試劑盒通用

ELISA Kit for Hydroxyproline

96T4.69-300 ng/mL人硫酸類肝素(HS)ELISA試劑盒通用

ELISA Kit for Heparan sulfate

96T6.25-400 ng/mL透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒通用

ELISA Kit for Hyaluronic acid
Rosetta-gami 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10說(shuō)明書    8010  人臍帶動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 (HUAEC)( 5×105 )

    8020  人臍帶靜脈平滑肌細(xì)胞 (HUVSMC)( 5×105 )

    8030  人臍帶動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 (HUASMC)( 5×105 )

二:大鼠正常細(xì)胞

     R1200  大鼠垂體細(xì)胞(RPC)(1×106)

    R1400  大鼠腦膜細(xì)胞(RMC)(5×105)

    R1510  大鼠中腦縫神經(jīng)細(xì)胞(腦脊)(RNr)(1×106)

    R1520  大鼠神經(jīng)黑質(zhì)細(xì)胞(RNsn)(1×106)

    R1530  大鼠顆粒細(xì)胞(RGC)(1×106)

    R1540  大鼠海馬趾神經(jīng)細(xì)胞(RHh)(1×106)
中文名稱:Rosetta-gami 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10說(shuō)明書
規(guī)格:100ul*10
用途:生化試劑。(用于科研試驗(yàn)研究)  
儲(chǔ)存條件: -70℃保存,必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個(gè)月。
外觀:(性狀) 干冰運(yùn)輸,單加10kg干冰費(fèi)
單位: 袋
操作方法:
一 、Rosetta-gami 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10說(shuō)明書熱激轉(zhuǎn)化法
1.    從-80℃冰箱取出感受態(tài)細(xì)胞冰浴融化后,吸取100μl感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到-20℃過(guò)夜預(yù)冷的搖菌管中,加入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物,輕輕混勻,冰浴30分鐘。
2.    42℃水浴熱激60秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,該過(guò)程不要搖動(dòng)搖菌管。
3.    向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB(SOC培養(yǎng)基可提高2-3倍轉(zhuǎn)化效率),37℃、180rpm、45分鐘復(fù)蘇菌種。
4.    根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求(質(zhì)粒,重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化),吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上,將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被吸收,倒置平       板,37℃過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
二、10分鐘快速轉(zhuǎn)化法                             
注:在使用卡那霉素,四環(huán)素等作為篩選抗性時(shí),需要在SOC培養(yǎng)基中復(fù)蘇以提高轉(zhuǎn)化效率,當(dāng)使用氨芐青霉素作為篩選抗性時(shí),該步驟可以省略。感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養(yǎng)基,在37℃ 180rpm孵育1小時(shí),然后轉(zhuǎn)移到37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上。
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。
2. DH 5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA并用手EP管底輕輕混勻,冰中靜置5分鐘。
3. 用200μl槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上,涂均勻,表面無(wú)水漬。
4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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