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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> 丙酮酸脫羧酶(PDC)微量法檢測(cè)試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6337 |
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【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說(shuō)明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6337 |
商品介紹
測(cè)定意義 PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。 測(cè)定原理: PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來(lái)進(jìn)一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過(guò)測(cè)定340 nm光吸收下降速率,來(lái)計(jì)算PDC活性。 自備儀器和用品: 研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
Anti-phospho-STAT1(pThr701)/FITC 熒光素標(biāo)記抗化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體IgG
Anti-phospho-STAT3(pThr705)/FITC 熒光素標(biāo)記抗化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體IgG
Anti-JNK2/FITC 熒光素標(biāo)記末端激2抗體IgG
Anti-phospho-STAT5a(pThr694)/FITC 熒光素標(biāo)記抗化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5a抗體IgG
Anti-JNK3/MAPK10/FITC 熒光素標(biāo)記末端激3抗體IgG
Anti-phospho-STAT6(pThr641)/FITC 熒光素標(biāo)記抗化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體IgG
Anti-phospho-Src(pTyr529)/FITC 熒光素標(biāo)記抗化Src原癌基因抗體IgG
Anti-phospho c-Raf/RAF1(pSer338/pTyr340)/FITC 熒光素標(biāo)記抗化原癌基因c-raf抗體IgG
丙酮酸脫羧酶(PDC)微量法檢測(cè)試劑盒帕莫 97%人血小板衍生生長(zhǎng)因子AA(PDGF-AA)免疫試劑盒α1-chimaerin蛋白抗體Rabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗牛IgG
3-雙(2-羥乙)氨-2-羥磺 98%人血小板型果糖激(PFKP)免疫試劑盒信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白9復(fù)合體7b抗體Rabbit Anti-Bov IgG 兔抗牛IgG
5,5'二硫代雙(2-) 98%人血小板相關(guān)免疫球蛋白(PAIg)免疫試劑盒鈣調(diào)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1抗體(唐氏綜合征候選區(qū)域蛋白1樣蛋白1)Rabbit Anti-Biotin/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗抗體IgG
N-乙-N-(2-羥-3-磺)-3-氧鈉鹽 99%人血小板相關(guān)抗體IgM(PA-IgM)免疫試劑盒鈣調(diào)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3抗體(唐氏綜合征候選區(qū)域蛋白1樣蛋白3)Rabbit Anti-Biotin/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗抗體IgG
2-乙磺鈉 98%人血小板生成素自身抗體(IgG)免疫試劑盒Centaurin α1抗體Rabbit Anti-Biotin/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗抗體IgG
N-三(羥)氨-2-羥磺 99%人血小板生成素受體(C-MPL)自身抗體IgG 免疫試劑盒B淋巴白血病/淋巴瘤11/鋅指蛋白856抗體Rabbit Anti-Biotin/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗抗體IgG
N-(3-磺)-3,3',5,5'-四聯(lián)鈉鹽 99%人血小板生成素(TPO)免疫試劑盒B淋巴白血病/淋巴瘤11B抗體Rabbit Anti-Biotin/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗抗體IgG
長(zhǎng)春質(zhì)堿 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%人血小板生長(zhǎng)因子(PGF)免疫試劑盒鈣平衡調(diào)節(jié)蛋白1抗體Rabbit Anti-Biotin/PE PE標(biāo)記的兔抗抗體IgG
三氧化鉬 99.95%人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)免疫試劑盒阿爾茨海默病淀粉樣蛋白相關(guān)膠原蛋白抗體Rabbit Anti-Biotin/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗抗體IgG
三氧化鉬 99.95%,100nm人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)免疫試劑盒老年癡呆相關(guān)類鈣粘蛋白CS1抗體Rabbit Anti-Biotin/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗抗體IgG
二硫化鉬 AR,99%人血小板激活因子乙酰水解2,質(zhì)(PAFAH2)免疫試劑盒凋亡誘導(dǎo)蛋白NALP3抗體Rabbit Anti-Biotin/FITC FITC標(biāo)記的兔抗抗體IgG
鉬粉 99.5% metals basis,2μm人血小板活化因子(PAF)免疫試劑盒豬圓環(huán)病Ⅱ型衣殼蛋白抗體Rabbit Anti-Biotin/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗抗體IgG
砷 99.995% metals basis人血小板反應(yīng)蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)免疫試劑盒血管激活鈣啟動(dòng)受體蛋白1抗體Rabbit Anti-Biotin/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗抗體IgG
砷標(biāo)準(zhǔn)溶液 濃度范圍:0.444(mg/L) ±0.028mg/L人血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)免疫試劑盒干生長(zhǎng)因子受體/表面分化抗原抗體Rabbit Anti-Biotin/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗抗體IgG
對(duì)氨胂 98%人血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)免疫試劑盒離子通道蛋白6抗體Rabbit Anti-Biotin/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗抗體IgG
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
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