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?猴痘病毒(MPV)核酸檢測試劑盒方法廠家

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所  在  地上海市

更新時間:2019-05-28 14:15:46瀏覽次數(shù):349次

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?猴痘病毒(MPV)核酸檢測試劑盒方法廠家,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。

組成及試劑配制:
1、?猴痘病毒(MPV)核酸檢測試劑盒方法廠家酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。

產(chǎn)品名稱英文名稱價格
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樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應(yīng)。
4. PCR擴增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。

anti-Mi2-Ab ELISA Kit隱花色素蛋白2抗體人抗Mi2抗體(anti-Mi2-Ab)ELISA試劑盒

anti-Ku-Ab ELISA Kit鈣通道L型α2多肽抗體人抗Ku抗體(anti-Ku-Ab)ELISA試劑盒

anti-IgA-Ab ELISA KitL型電壓依賴型鈣通道β3抗體人抗IgA抗體(anti-IgA-Ab)ELISA試劑盒

anti-DNase B ELISA KitL型電壓依賴型鈣通道β4抗體人抗DNA酶B抗體(anti-DNase B)ELISA試劑盒

anti-DNase B Ab ELISA Kit電壓依賴性鈣通道CACNA1G+CACNA1H抗體人抗DNA酶B抗體(anti-DNase B Ab)ELISA試劑盒

BP180-Ab ELISA Kit鈣結(jié)合蛋白1抗體人抗BP180抗體(BP180-Ab)ELISA試劑盒

anti-BP180-Ab ELISA Kit神經(jīng)型一氧化氮合成酶結(jié)合蛋白抗體人抗BP180抗體(anti-BP180-Ab)ELISA試劑盒

BB-Ab ELISA Kit毒蕈堿型乙酰膽堿受體M4抗體人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA試劑盒

LP Ag ELISA Kit鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體軍團菌抗原(LP Ag)ELISA試劑盒

LP Ab-IgM ELISA Kit周期蛋白結(jié)合蛋白抗體軍團菌抗體IgM(LP Ab-IgM)ELISA試劑盒

LP Ab-IgG ELISA Kit細胞分裂周期蛋白2抗體軍團菌抗體IgG(LP Ab-IgG)ELISA試劑盒

LP Ab-IgA ELISA Kit細胞分裂周期調(diào)控蛋白45抗體軍團菌抗體IgA(LP Ab-IgA)ELISA試劑盒

FZD8 ELISA Kit染色體相關(guān)蛋白H抗體卷曲蛋白8(FZD8)ELISA試劑盒

Agrin ELISA Kit中心體蛋白質(zhì)76抗體聚集蛋白(Agrin)ELISA試劑盒

MIF ELISA Kit中心體蛋白152抗體巨噬細胞移動因子(MIF)ELISA試劑盒

MIF ELISA Kit酪蛋白激酶1γ2/casein kinase Iγ1抗體巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒

MIP-5 ELISA Kit唇裂和腭裂相關(guān)跨膜蛋白1抗體巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISA試劑盒

MIP-3β/ELC/CCL19 ELISA Kit趨化素樣因子超家族成員8抗體巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA試劑盒

MIP-3α/CCL20 ELISA Kit趨化素樣因子超家族成員1抗體巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒

MIP-2 ELISA Kit神經(jīng)細胞蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積病蛋白CLN6抗體巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒

MIP-1β/CCL4 ELISA Kit甘氨酸結(jié)合蛋白抗體巨噬細胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒

MIP-1α/CCL3 ELISA Kit多巴胺D1受體相互作用蛋白抗體巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA試劑盒

AmAC-1 ELISA KitCapicua蛋白抗體巨噬細胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)ELISA試劑盒

MCF ELISA Kit碳酸酐酶6抗體巨噬細胞趨化因子(MCF)ELISA試劑盒

MDC/CCL22 ELISA Kit間隙連接蛋白29抗體巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒

M-CSFR ELISA Kit間隙連接蛋白29抗體巨噬細胞集落刺激因子受體(M-CSFR)ELISA試劑盒

M-CSF ELISA Kit細胞表面趨化因子受體7抗體巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒

MSP ELISA Kit神經(jīng)母細胞瘤源性分泌蛋白抗體巨噬細胞刺激蛋白(MSP)ELISA試劑盒

TRAP ELISA Kit染色質(zhì)修飾蛋白2B抗體酒石酸鹽抵抗的酸性磷酸酶(TRAP)ELISA試劑盒

SPAG7 ELISA Kit細胞骨架相關(guān)蛋白1/微管蛋白折疊輔助因子B抗體相關(guān)抗原7(SPAG7)ELISA試劑盒

反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

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