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貨號 | GOY-01S6321 |
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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
輔酶ⅠNAD(H)含量微量法檢測試劑盒 | 100管/48樣 | 微量法 | GOY-01S6321 |
商品介紹
測定意義 輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要氫受體,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時,形成大量的ROS,同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環(huán)的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調(diào)控作用。 測定原理 分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進一步采用MTT還原法檢測。 需自備的儀器和用品 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
② 細菌/細胞樣本:
先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間 30min可以延長到 40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通??梢允箿y定正常。
骨成型蛋白4(BMP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
骨成型蛋白4(BMP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
骨成型蛋白4(BMP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A) 48T/96T Homo sapiens (Human)
骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor II (BMPRII) 48T/96T Homo sapiens (Human)
骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor II (BMPRII) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor II (BMPRII) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE) 48T/96T Homo sapiens (Human)
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二級淋巴組織趨化因子(SLC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Secondary Lymphoid Tissue Chemokine (SLC) 48T/96T Homo sapiens (Human)
趨化因子C-基元受體1(XCR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Chemokine C-Motif Receptor 1 (XCR1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
白介素8受體α(IL8Rα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Interleukin 8 Receptor Alpha (IL8Ra) 48T/96T Homo sapiens (Human)
唾液酸結(jié)合Ig樣凝集素3(SIGLEC3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 3 (SIGLEC3) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
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睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF) 48T/96T Homo sapiens (Human)
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血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(PROCR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Protein C Receptor, Endothelial (PROCR) 48T/96T Chicken (Gallus)
α2-纖溶酶抑制因子(α2PI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Alpha-2-Plasmin Inhibitor (a2PI) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(PROCR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Protein C Receptor, Endothelial (PROCR) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
內(nèi)分泌腺來源血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF) 48T/96T Homo sapiens (Human)
乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 乳酸脫氫酶(LDH)可見分光光度法檢測試劑盒
NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒 NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)微量法檢測試劑盒
NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒 NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)紫外分光光度法檢測試劑盒
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NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)測試盒 NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)紫外分光光度法檢測試劑盒
線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶測試盒 線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶微量法檢測試劑盒
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NADH氧化酶(NOX)測試盒 NADH氧化酶(NOX)微量法檢測試劑盒
NADH氧化酶(NOX)測試盒 NADH氧化酶(NOX)可見分光光度法檢測試劑盒
檸檬酸合酶(CS)測試盒 檸檬酸合酶(CS)微量法檢測試劑盒
檸檬酸合酶(CS)測試盒 檸檬酸合酶(CS)可見分光光度法檢測試劑盒
丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒 丙酮酸脫羧酶(PDC)微量法檢測試劑盒
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乙醇含量測試盒 乙醇含量微量法檢測試劑盒
乙醇含量測試盒 乙醇含量可見分光光度法檢測試劑盒
輔酶ⅠNAD(H)含量微量法檢測試劑盒乙醇脫氫酶(ADH)測試盒 乙醇脫氫酶(ADH)微量法檢測試劑盒
乙醇脫氫酶(ADH)測試盒 乙醇脫氫酶(ADH)紫外分光光度法檢測試劑盒
單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)微量法檢測試劑盒
單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)紫外分光光度法檢測試劑盒
測定步驟:
1、 酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。
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