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輔酶ⅠNAD(H)含量微量法檢測試劑盒

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更新時間:2022-04-20 15:37:50瀏覽次數(shù):343次

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elisa檢測試劑盒
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生化檢測試劑盒
科研細胞
貨號 GOY-01S6321
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【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!

產(chǎn)品名稱規(guī)格檢測方法貨號
輔酶ⅠNAD(H)含量微量法檢測試劑盒100管/48樣微量法GOY-01S6321

商品介紹

測定意義

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要氫受體,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時,形成大量的ROS,同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環(huán)的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調(diào)控作用。

測定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進一步采用MTT還原法檢測。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
QQ截圖20220307153443.png

所需的儀器和用品:

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

樣本和試劑浪費!

1、樣本制備

① 組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取

② 細菌/細胞樣本:

先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

注意事項:

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;

(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間 30min可以延長到 40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般

將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通??梢允箿y定正常。

骨成型蛋白4(BMP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4)    48T/96T    Homo sapiens (Human)

骨成型蛋白4(BMP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)

骨成型蛋白4(BMP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4)    48T/96T    Mus musculus (Mouse)

骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A)    48T/96T    Homo sapiens (Human)

骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)

骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A)    48T/96T    Mus musculus (Mouse)

骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor II (BMPRII)    48T/96T    Homo sapiens (Human)

骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor II (BMPRII)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)

骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor II (BMPRII)    48T/96T    Mus musculus (Mouse)

上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE)    48T/96T    Homo sapiens (Human)

上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE)    48T/96T    Mus musculus (Mouse)

二級淋巴組織趨化因子(SLC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Secondary Lymphoid Tissue Chemokine (SLC)    48T/96T    Homo sapiens (Human)

趨化因子C-基元受體1(XCR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Chemokine C-Motif Receptor 1 (XCR1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)

白介素8受體α(IL8Rα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Interleukin 8 Receptor Alpha (IL8Ra)    48T/96T    Homo sapiens (Human)

唾液酸結(jié)合Ig樣凝集素3(SIGLEC3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 3 (SIGLEC3)    48T/96T    Mus musculus (Mouse)

唾液酸結(jié)合Ig樣凝集素3(SIGLEC3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 3 (SIGLEC3)    48T/96T    Homo sapiens (Human)

睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF)    48T/96T    Homo sapiens (Human)

睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)

血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(PROCR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Protein C Receptor, Endothelial (PROCR)    48T/96T    Chicken (Gallus)

α2-纖溶酶抑制因子(α2PI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Alpha-2-Plasmin Inhibitor (a2PI)    48T/96T    Bos taurus; Bovine (Cattle)

血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(PROCR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Protein C Receptor, Endothelial (PROCR)    48T/96T    Mus musculus (Mouse)

內(nèi)分泌腺來源血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)    ELISA Kit for Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF)    48T/96T    Homo sapiens (Human)

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單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒    單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)微量法檢測試劑盒

單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒    單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)紫外分光光度法檢測試劑盒

測定步驟:

1、 酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。

3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。

5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。


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