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2645次測定血液或其它體液化學(xué)成分時,樣品內(nèi)蛋白質(zhì)的存在常常干擾測定。因此,需要先做成無蛋白血濾液再行測定。
無蛋白血濾液制備的基本原理是以蛋白質(zhì)沉淀劑沉淀蛋白,用過濾法或離心法除去沉淀的蛋白?,F(xiàn)介紹幾種常用的方法:
1.鎢酸法
原理: 鎢酸鈉與硫酸混合,生成鎢酸:
Na2WO4 + H2SO4 → H2WO4 十Na2SO4
血液中蛋白質(zhì)在pH 值小于等電點(diǎn)的溶液中可被鎢酸沉淀:沉淀液過濾或離心,上清液即為無色而透明、pH 約等于6 的無蛋白濾液??晒┓堑鞍椎?、血糖、氨基酸、尿素、尿酸及氯化物等項(xiàng)測定使用。
制備方法:
(1)取50ml 錐形瓶1 只,加入蒸餾水7 份;(2)用奧氏吸管吸取抗凝血1 份,擦去管壁外血液,將吸管插入錐形瓶底部,緩緩放出血液。放完血液后,將吸管提高吸取上清液再吹入,反復(fù)洗管3 次。充分混合,使紅細(xì)胞*溶解;( 3)加入0.333mol/l,硫酸溶液1 份,隨加隨搖,充分混勻,此時血液由鮮紅變成棕色,靜置5-10min ,使其酸化*;(4) 加入10 %鎢酸鈉1 份,隨加隨搖;(5)放置約5min 后,如振搖亦不再發(fā)生泡沫,說明蛋白質(zhì)已*變性沉淀。用定量濾紙過濾或離心(2,500r/min , 10min) ,即得*澄清無色之無蛋白血濾液。
用此法制得的無蛋白血濾液為10 倍稀釋的血濾液。即每毫升血濾液相當(dāng)于0.lml全血。
試劑:(1) 10 %鎢酸鈉溶液(2) 0.333mol/L 硫酸溶液
2.氫氧化鋅法
原理:血液中蛋白質(zhì)在pH 大于等電點(diǎn)的溶液中可用znZ 十來沉淀。生成的氫氧化鋅本身為膠體可將血中葡萄糖以外的許多還原性物質(zhì)吸附而沉淀,所以此法所得濾液Z適作血液葡萄糖的測定(因?yàn)槠咸烟嵌嗍抢盟倪€原性來定量的)。但測定尿酸和非蛋白氮時含量降低,不宜使用此濾液。
制備方法:(1)取干燥、潔凈的50ml 錐形瓶或大試管1 支,準(zhǔn)確加入7 份水;(2)加入混勻的抗凝血1 份,搖勻;(3)加入10 %硫酸鋅溶液1 份,搖勻;(4)慢慢加入0.5mol / L 氫氧化鈉溶液1 份,邊加邊搖,放置5min ,用定量濾紙過濾或離心(2,500,10min ) ,除去沉淀,便得到*澄清的無蛋白血濾液。此濾液亦為稀釋10 倍之血濾液。
試劑:(l) 10 %硫酸鋅溶液(2) 0.5mol / L 氫氧化鈉溶液
3.三氯醋酸法
原理:三氯醋酸為一有機(jī)強(qiáng)酸,能使蛋白質(zhì)變性而沉淀。
制備方法:取10 %三氯醋酸9 份置于錐形瓶或大試管中,加1 份已充分混勻的抗凝血液。加時要不斷搖動,使其均勻。靜置5min ,過濾或離心。即得10 倍稀釋之清明透亮的濾液。
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