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人紅細胞生成素抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用方法

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人紅細胞生成素抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人紅細胞生成素抗體(EPO  Ab)的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被的微孔中依次加入紅細胞生成素抗體(EPO Ab),再與 HRP標記的抗原    ,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后加底物   TMB。用純化顯色。TMB在  HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的紅細胞生成素抗體(EPO Ab)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人紅細胞生成素抗體(EPO  Ab)濃度。
試劑盒組成
標本要
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過
(HRP)活性。
人紅細胞生成素抗體(EPO Ab)酶聯(lián)免疫分析操作步驟
1.  標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
2.  加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,
然后再加待測樣品 10µl(樣品Z終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后
37℃溫育30分鐘。
20倍稀釋后備用
配液:將 20倍濃
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜
重復 5次,拍干。
30秒后棄去,如此
加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10分鐘.
10.終止:每孔加終止液    50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止
液后 15分鐘以內進行。
人紅細胞生成素抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總:
計算
以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標,在坐標紙上
,根據(jù)樣品的
OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與  OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有
析出,稀釋時可在浴中加溫助溶,洗滌時不影響
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本  OD值
大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計
算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
人紅細胞生成素抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

 

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