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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR類(lèi)>>核酸純化試劑盒>> 32次/盒干血斑基因組DNA提取試劑盒
規(guī)格 | 32次/盒 、50次/盒 | 貨號(hào) | YS-P013220 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
干血斑基因組DNA提取試劑盒 | 50次/盒 | YS-P013220 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
人B淋巴瘤因子2(Bcl-2)秋水仙堿三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體
人尿微量白蛋白(MAU)秋水仙堿(標(biāo)準(zhǔn)品)載脂蛋白B抗體
人促黃體生成激素(LH)硫酸粘桿菌素,多粘菌素E硫酸鹽花生四烯酸15脂氧合酶2抗體
人腎素(REN)硫酸粘桿菌素(標(biāo)準(zhǔn)品)載脂蛋白C4抗體
人組織蛋白酶C(CTSC) 吡啶硫酮銅低密度脂蛋白受體銜接蛋白抗體
人C-肽(C-P)鹽酸依氟鳥(niǎo)氨酸原始廣泛存在蛋白1抗體
人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)色甘酸鈉錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白37抗體
人載脂蛋白A1(ApoA1) 色甘酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)α1,4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶1
人層粘蛋白(LN)環(huán)孢菌素,環(huán)孢素A,環(huán)孢霉素A血管緊張素Ⅱ受體相關(guān)蛋白抗體
人I型膠原(COL1)環(huán)孢菌素,環(huán)孢素A,環(huán)孢霉素A(標(biāo)準(zhǔn)品)膜粘連蛋白2受體抗體
人基質(zhì)金屬蛋白酶25(MMP-25)鹽酸噻氯匹定血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑抗體
人基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)鹽酸噻氯匹定(標(biāo)準(zhǔn)品)拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子抗體
人基質(zhì)金屬蛋白酶12(MMP-12)阿糖胞苷(進(jìn)分)α-1抗胰糜蛋白酶抗體
人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)阿糖胞苷α-1抗胰蛋白酶抗體
人可溶性間粘附分子1(sICAM-1/CD54)阿糖胞苷(標(biāo)準(zhǔn)品)ATP結(jié)合蛋白家族6抗體
人降鈣素(CT) 達(dá)卡巴三磷酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗體
干血斑基因組DNA提取試劑盒ACD 腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常蛋白抗體二甲基烯酸1,4-丁二酯, 含100ppm MEHQ 穩(wěn)定劑, 95%
AchE 乙酰膽堿酶抗體二烯酸1,3-丁二酯, 含500 ppm 對(duì)苯二酚(HQ)穩(wěn)定劑, 98%
Acinus Acinus抗體苯磺酸 98%
phospho-Acinus(Ser1180) 磷酸化腺泡Acinus蛋白抗體正丁硫 standard for GC, ≥99% (GC)
Ack1 醋酸激酶1抗體N-丁基二乙 99%
Phospho-Ack1(Tyr857/858) 磷酸化Ack1抗體雙酚A三雙甲基烯酸酯 試劑級(jí)
Phospho-Ack1(Tyr284) 磷酸化Ack1抗體1-芐基哌 97%
Phospho-Ack1(Tyr326) 磷酸化Ack1抗體3-溴苯酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
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