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行業(yè)產(chǎn)品
當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>ELISA檢測(cè)試劑盒>>人ELISA檢測(cè)試劑盒>> 人丙酮酸脫氫酶E1(PDH E1)ELISA檢測(cè)試劑盒
人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)ELISA檢測(cè)試劑盒
人結(jié)腸癌抗原(CCA)ELISA檢測(cè)試劑盒
服務(wù):
我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要,比如在檢測(cè)范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測(cè)試劑盒,有效控制檢測(cè)試劑成本。并可提供免費(fèi)代測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 人丙酮酸脫氫酶E1(PDH E1)ELISA檢測(cè)試劑盒 |
英文名稱 | Human pyruvate dehydrogenase E1 (PDH E1) ELISA Kit |
貨號(hào) | YS-H11081 |
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試劑配制
1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
Cy5標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1mlRabbit Anti-horse IgM/Cy5
Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 0.1mlGoat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647
Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗人IgG 0.1mlMouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 350
Cy5標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.1mlMouse Anti-rat IgG/Cy5
Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗親和素 0.1mlRabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 488
生物素標(biāo)記的兔抗雞IgM 0.1mlRabbit Anti-chicken IgM/Bio
生物素標(biāo)記的兔抗羊IgM 0.5mlRabbit Anti-Goat IgM/Bio
Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgG 0.1mlRabbit Anti-human IgG/Cy5.5
PE標(biāo)記的兔抗猴IgM 0.1mlRabbit Anti-MK IgM/PE
Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 0.1mlRabbit Anti-rat IgM/Alexa Fluor 555
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的驢抗人IgG 0.1mlDonkey Anti-human IgG/HRP
β淀粉樣肽1-16(多肽蛋白) 0.5mgBeta-Amyloid(1-16)
5-羥色胺受體1A(多肽) 0.5mg5-HTR1A (5-HT1A (5-hydroxytryptamine/serotonin receptor 1A; 5HT1a; ADRBRL1; ADRB2RL1; HTR1A)
血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1(抗原) 0.5mgCD31 (PECAM-1)
人丙酮酸脫氫酶E1(PDH E1)ELISA檢測(cè)試劑盒50g D- 泛酸鈣 D-Pantothenic Acid Hemicalcium Salt 4℃避光保存
5g 木瓜蛋白酶 Papain 4℃保存
25g 多聚甲醛 Paraformaldehyde 密封干燥保存
100mg 果膠酶 Pectinase( Aspergillus Niger) 4℃保存
100mg 果膠酶 Y-23 Pectolyase Y-23 密封干燥保存
25g 果膠 Pectin 室溫干燥保存
250g 聚乙二醇 12000 PEG12000 室溫保存
250g 聚乙二醇 20000 PEG20000 室溫保存
250g 聚乙二醇 3350 PEG 3350 室溫陰涼干燥保存
250g 聚乙二醇 4000 PEG 4000 室溫陰涼干燥保存
250g 聚乙二醇 6000 PEG6000 室溫陰涼干燥保存
250g 聚乙二醇 8000 PEG8000 室溫保存
1Mu 青霉素 G 鉀鹽 Penicillin G K Salt 室溫干燥保存
操作步驟:
1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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