培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

?

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

果菜維生素U（S-Methylmethionine）比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 PASE-2蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次

轉(zhuǎn)基因水稻LibertyLink62品系基因檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 石蠟切片組織MAPK蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

病毒包裝 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20樣本

同位素法DNA南方雜交試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次

Hanks鈣鎂平衡緩沖溶（HBSS）不含NaHCO3 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：500毫升

遠(yuǎn)西方雜交（FAR WESTERN BLOT） 印跡同位素檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次

血清樣品相法去內(nèi)毒素試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)胞總脂肪酶（lipase）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

體氧化應(yīng)激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（單線態(tài)氧氣） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

石蠟切片游離膽固醇毛地黃皂苷法（DIGITONIN）高氯酸萘醌（PAN）直接染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

PrimaCell™大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞試劑盒規(guī)格五內(nèi)脂英文名稱：Body fat分子式：468.677分子量：C30H44O4號：136040-43-2

無水氯鋁分子式：133.34英文名稱：Anhydrous aluminium chloride號：7446-70-0分子量： AlCl3

3-(3-硝)-1H-吡唑分子式：189.17英文名稱：3- (3- nitro phenyl) -1H-號：59843-77-5分子量： C9H7N3O2

番茄汁英文名稱：Tomato Juice分子式：862.74分子量：C42H38O20號：81-27-6

番瀉苷B英文名稱：The B分子式：862.73912分子量：C43H38O20號：128-57-4

利托君英文名稱：Ritodrine hydrochloride分子式：323.81分子量：C17H22ClNO3號：23239-51-2

金蓮橙O英文名稱：Tropeolin O分子式：316.27分子量： C12H9N2O5S.Na號：547-57-9

硫酸氫鉀分子式：136.17英文名稱：KHSO4號：7646-93-7分子量： KHSO4

(1R)-1-[(1R)-1-(二環(huán)己膦)乙]-2-[2-(二膦)]二茂鐵分子式：670.62英文名稱：(1R) -1-[(1R) -1- (dicyclohexylphosphonium) ethyl]-2-[2- (two phenyl phosphine) phenyl] Mao Tie two號：388079-60-5分子量： C42H48FeP2 10*

4-乙雙環(huán)己-3,4-二氟分子式：306.43英文名稱：4- -3,4- two - ethyl bicyclohexyl號：118164-50-4分子量： C20H28F2

6-溴異喹啉分子式：208.05英文名稱：6- bromide號：34784-05-9分子量： C9H6BrN