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上海研生實(shí)業(yè)有限公司
初級會(huì)員 | 第10年

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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR類>>DNA提取試劑盒>> 10次5'RACE試劑盒

5'RACE試劑盒

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產(chǎn)品型號10次

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2021-11-19 15:44:42瀏覽次數(shù):117次

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規(guī)格 10次 貨號 YS-P013279
品牌 YSRIBIO
5'RACE試劑盒原理是由一對引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

5'RACE試劑盒

10次

YS-P013279

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

 

QQ截圖20191211135002.jpg 

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

人多巴受體D3(D3R/DRD3)睪酮,素螺旋一環(huán)一螺旋蛋白5抗體

人多巴受體D4(D4R/DRD4)睪酮(標(biāo)準(zhǔn)品)二磷酸3核苷酸酶抗體

人多巴受體D5(D5R/DRD5)鹽酸丁卡因腦蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶29抗體

人多巴脫羧酶(DDC)  鹽酸丁卡因(標(biāo)準(zhǔn)品)智力發(fā)育調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白BRWD3抗體

人多巴轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT)苯甲唑啉鹽酸鹽/鹽酸妥拉唑林生物素酶抗體

人多巴色素異構(gòu)酶(DT) 托特羅定Bax相互作用因子1抗體

人多功能蛋白聚糖(VS)托特羅定(標(biāo)準(zhǔn)品)表皮生長因子反應(yīng)蛋白2抗體

人多聚血清蛋白(PHSA) 托吡酯BCL2相關(guān)X蛋白抗體

人多聚免疫球蛋白受體(PIGR/SC)托吡酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Bcl2樣凋亡蛋白13抗體

人多肽YY (PYY)VX-680/MK0457,陶扎色替Bcl2樣凋亡蛋白14抗體

人多效生長因子(PTN)曲司氯銨Bcl2蛋白修飾因子抗體

人多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)AG-014699骨形態(tài)發(fā)生蛋白11抗體

人二氧化酶(DAO) 卡非佐米BCL2樣15促凋亡蛋白抗體

人二磷酸尿核苷葡糖酸基轉(zhuǎn)移酶2家族肽B4(UGT2B4)CEP-18770骨堿性磷酸酶抗體

人二氫硫辛酸脫氫酶(DLD)地馬格列磷酸化T淋巴連接蛋白抗體

人二氫硫辛酸轉(zhuǎn)乙酰酶(DLAT)鹽酸諾拉曲噻磷酸化T淋巴連接蛋白抗體
5'RACE試劑盒CD2  CD2抗體蘇紅G 95%

SLAMF9/CD2F-10  CD2F-10抗體蘇紅G 分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于食品分析,≥97.0% (HPLC)

SLAMF9  CD2F-10抗體二甲胂酸鈉 分析標(biāo)準(zhǔn)品

CD3  CD3抗體二甲基二硫代氨酸鈉 98%

Bcr  Bcr抗體三氟磺酸鈧 98%

Phospho-Bcr(Tyr177)  磷酸化T淋巴受體抗體磷酸氫二鈉,二水 for HPLC, ≥99%(T)

CD30/TNFRSF8  CD30抗體十二烷基硫酸鈉 99.0%,超純級

CD31/PECAM-1  血小板內(nèi)皮黏附分子-1抗體吡咯烷二硫代甲酸鈉 80%


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