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操作步驟:
1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。
服務:
我們可以根據您的應用需要,比如在檢測范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本。并可提供免費代測。
產品名稱 | 人胰激肽原酶(PK)ELISA檢測試劑盒 |
英文名稱 | Human pancreatic kallikrein (PK) ELISA Kit |
貨號 | YS-H12625 |
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試劑配制
1、酶聯板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Alexa Fluor 555標記的兔抗人分泌型IgA 0.1mlRabbit Anti-human sIgA/Alexa Fluor 555
PE標記的兔抗豬IgG 0.1mlRabbit Anti-pig IgG/PE
Cy5.5標記的羊抗小鼠IgG 0.1mlGoat Anti-Mouse IgG/Cy5.5
羅丹明標記的羊抗雞IgG 0.3mlGoat Anti-Chicken IgG/RBITC
堿性磷酸酶(AP)標記的小鼠抗人IgM 0.1mlMouse Anti-human IgM/AP
Alexa Fluor 488標記的小鼠抗牛IgG 0.1mlMouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 488
PE-Cy7標記的兔抗牛IgG 0.1mlRabbit Anti-Bov IgG/PE-Cy7
Cy3標記的兔抗狗IgG 0.1mlRabbit Anti-dog IgG/Cy3
FITC標記的兔抗豚鼠IgM 0.3mlRabbit Anti-Guinea pig IgM/FITC
Cy5標記的兔抗人分泌型IgA 0.1mlRabbit Anti-human sIgA/Cy5
生物素標記的兔抗小鼠IgM 0.3mlRabbit Anti-mouse IgM/Bio
堿性磷酸酶(AP)標記的兔抗豬IgG 0.1mlRabbit Anti-pig IgG/AP
膠體金標記的驢抗兔IgG 0.5mlDonkey Anti-rabbit IgG/Gold
α-1抗胰糜蛋白酶 10mgAACT(Alpha-1-Anti-chymotrypsin)
人胰激肽原酶(PK)ELISA檢測試劑盒茯苓酸 29070-92-6 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg/vial
蔓荊子黃素 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial
二氫楊梅素 27200-12-0 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial
膠樹脂 85026-55-7 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial
升苷 80681-45-4 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg/vial
2”-O-沒食子?;鸾z桃甙 53209-27-1 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial
五味子丙素 61301-33-5 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial
澤瀉醇 B 乙酸酯 26575-95-1 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial
桑黃素 480-16-0 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg/vial
蒼術素 55290-63-6 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial
中堿 2752-64-9 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg/vial
澳洲茄邊堿 20311-51-7 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg/vial
10-(P) 10-去乙?;仙即? 規(guī)格: 5mg
乙酰哈巴苷 6926-14-3 規(guī)格: 20mg
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