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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR類>>DNA提取試劑盒>> 100mL組織保存液
規(guī)格 | 100mL | 貨號(hào) | YS-P013251 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
組織保存液 | 100mL | YS-P013251 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
人硫酸軟骨素(CS) 吲哚美辛促腎上腺皮質(zhì)激素(1-39)抗體
人絨毛膜促性腺激素β(CGβ) 吲哚美辛(標(biāo)準(zhǔn)品)促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH(18-39)抗體
人碳酸酐酶XII(CA12)西米替汀促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH (7-23)抗體
人染色盒同源物3(CBX3)西米替汀(標(biāo)準(zhǔn)品)活性依賴的神經(jīng)保護(hù)肽抗體
人染色質(zhì)區(qū)解旋酶DNA結(jié)合蛋白3(CHD3)阿德福韋/阿德福韋酯α1酸性糖蛋白1/類粘蛋白1抗體
人染色質(zhì)區(qū)解旋酶DNA結(jié)合蛋白5(CHD5)阿德福韋/阿德福韋酯(標(biāo)準(zhǔn)品)α1酸性糖蛋白2抗體(類粘蛋白2)
人嗜鉻蛋白A/胰抑制素(CgA/Pancreastatin) R-鹽酸普拉克索磷酸化水通道蛋白2抗體
人神經(jīng)絲蛋白3(NEF3)氯酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶抗體
人輕肽神經(jīng)絲蛋白(NEFL(標(biāo)準(zhǔn)品)抗利尿激素/血管升壓素/加壓素/血管加壓素抗體
人神經(jīng)型一氧化氮合酶(NOS1/nNOS)恩諾沙星ATP結(jié)合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體
人V-Jun瘤病癌基因同源物(C-jun)恩諾沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)糖還原酶抗體
人克拉拉蛋白(CC16) 鹽酸恩諾沙星人血清白蛋白抗體
人封閉蛋白1(CLDN1) 鹽酸恩諾沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)抗體(采用活疫苗制備)
人封閉蛋白14(CLDN14) 佐米曲普坦活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體
人白分化抗原CD109(CD109) 胸腺肽alpha 1腺苷酸激酶-1抗體
人白分化抗原CD30(CD30) 替加氟纖維狀肌動(dòng)蛋白抗體
組織保存液BAFFR/CD268 B活化因子受體抗體異丁香酚(正+反) 分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析
bFGF/FGF-2 堿性成纖維生長(zhǎng)因子抗體異戊 99%
BGP 骨保護(hù)蛋白/骨鈣素抗體無水三氯化鐵 ≥99.99% metals basis
Bid BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體三氟磺酸銦 98%
BIN1 橋連整合因子蛋白抗體2-亞氨基生物素 98%
Bim 死亡調(diào)解子抗體肌苷-5′-磷酸二鈉鹽 99%
phospho-Bim(Ser87) 磷酸化死亡調(diào)解子抗體5--2- 98%
phospho-Bim(Ser55) 磷酸化死亡調(diào)解子抗體胰島素 ≥27 USP units/mg (HPLC)
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
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