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技術(shù)文章

這樣做ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)*

閱讀:163發(fā)布時(shí)間:2017-6-20

ELISA試劑盒能夠簡(jiǎn)略、地從瓊脂糖凝膠上純化收回DNA段,一起除掉蛋白質(zhì)、其它有機(jī)化合物、無(wú)機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)??墒栈?00bp–40 kb DNA段,可純化高達(dá)10μg的DNA段,收回率可達(dá)80%以上(<100bp或>10kb的DNA段收回率為30–50%)。運(yùn)用ELISA試劑盒收回的DNA可適用于各種慣例操作,包含酶切、PCR、測(cè)序、文庫(kù)挑選、銜接和轉(zhuǎn)化等各種分子生物學(xué)試驗(yàn)。
ELISA試劑盒注意事項(xiàng):
1、 不一樣廠家出產(chǎn)的試劑盒因出產(chǎn)工藝和操作方法略有不一樣,必須按照所用試劑盒嚴(yán)厲操作,不然簡(jiǎn)單發(fā)生檢查成果的不確定性.
2、 若不一樣批號(hào)試劑的不一樣組分(A液或酶工作液),或不一樣試劑的不一樣組分進(jìn)行穿插運(yùn)用,有也許呈現(xiàn)顯色淺或本底高,花板等景象。
3、 加樣時(shí)樣品量差錯(cuò),關(guān)于陰或很陽(yáng)的標(biāo)本影響不大,但對(duì)閾值鄰近的標(biāo)本影響極大,主張校正加樣器。
4、 反應(yīng)時(shí)間的差錯(cuò),做很多標(biāo)本時(shí),孔和zui終一孔以及一些特別標(biāo)本也許影響較大。
5、 因?yàn)榈纹康木苄员囟ú蝗缂訕悠?,不掃除不一樣滴頭滴量的差錯(cuò)。另外滴加過(guò)程中是不是發(fā)生氣泡、速度是不是均勻,是不是顫抖等影響液量的要素均可致使以上狀況。高標(biāo)準(zhǔn)請(qǐng)求時(shí)應(yīng)運(yùn)用加樣器。
6、 閾值鄰近實(shí)際上是個(gè)灰區(qū)(gray scale),不能截然分為陰性、陽(yáng)性,國(guó)外廠家均請(qǐng)求對(duì)這有些可疑標(biāo)本進(jìn)行奇數(shù)次復(fù)檢,以次數(shù)多者為準(zhǔn),如一次陽(yáng)兩次陰zui終判為陰,但實(shí)際上是不是為陰不好說(shuō),只要判為可疑,臨床上能夠讓患者過(guò)一段時(shí)間后再測(cè)。
7、 肉眼調(diào)查稍顯色,酶標(biāo)儀打印為陰性的標(biāo)本在實(shí)際工作中是難以避免的,肉眼目測(cè)成果不可靠,應(yīng)以酶標(biāo)儀判讀為準(zhǔn)。
8、 由陰性變?yōu)閺?qiáng)陽(yáng)性因素多為操作過(guò)程中漏加試劑等有關(guān)。
9、 ELISA試劑盒臨界值鄰近標(biāo)本波動(dòng)為正常景象,任何ELISA試劑盒均不可避免。能夠考慮將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。

 


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