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技術(shù)文章

ELISA試劑盒顯色反響應避光運用

閱讀:198發(fā)布時間:2017-7-31

ELISA試劑盒這類反響的定性成果可以用肉眼判別。目視標本也無色或近于無色者判為陰性,顯色明晰者為陽性。但在ELSIA試劑盒中,正常人血清反響后??沙尸F(xiàn)呈色的本底,此本底的深淺因ELISA試劑盒的構(gòu)成和試驗的條件不一樣而異,因而試驗中有必要加測陰性對照。陰性對照的構(gòu)成應為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6)。在用肉眼判別成果時,更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的目標。此刻酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)品。反響的溫度和時刻仍是影響顯色的因素。在必定時刻內(nèi),陰性孔可堅持無色,而陽性孔則隨時刻的延伸而呈色加強。恰當進步溫度有助于加快顯色進行。在定量測定中,參加底物后的反響溫度和時刻應按規(guī)定力求。ELISA試劑盒定性測定的顯色可在室溫進行,時刻通常不需要嚴格控制,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色狀況恰當縮短或延伸反響時刻,及時判別。
ELISA試劑盒OPD底物顯色通常在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深,再延伸反響時刻,可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反響結(jié)束時參加停止液停止反響。OPD產(chǎn)品用硫酸停止后,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。
ELISA試劑盒TMB受光照的影響不大,可在室溫中置于操作臺上,邊反響調(diào)查成果。但為保證試驗成果的穩(wěn)定性,宜在規(guī)定的恰當時刻閱讀成果。TMB經(jīng)HRP作用后,約40分鐘顯色達高峰,隨即逐漸減弱,ELISA試劑盒至2小時后即可*消退至無色。TMB的停止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍色保持較長時刻(12-24小時)不褪,是目視判別的杰出停止劑。此外,各類酸性停止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色,此刻可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。

 


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