雙抗體夾心法檢測(cè)抗原
雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原zui常用的辦法，但要留意的是在一步法（待測(cè)抗原與酶標(biāo)抗體一同參加反響）測(cè)定中，當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時(shí)，過(guò)量抗原別離和固相抗體及酶標(biāo)抗體，而不再構(gòu)成“夾心復(fù)合物”呈現(xiàn)鉤狀效應(yīng)，乃至可不顯色而呈現(xiàn)假陰性成果。因而在使用一步法試劑測(cè)定標(biāo)本中含量可反常增高的物質(zhì)（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時(shí)，應(yīng)留意可測(cè)規(guī)模的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。 雙抗體夾心法測(cè)抗原的另一留意點(diǎn)是類風(fēng)濕因子（RF）的攪擾。RF是一種本身抗體，多為IgM型，能和多種動(dòng)物IgG的Fc段。用作雙抗體夾心法檢測(cè)的血清標(biāo)本中如含有RF，它可充任抗原成份，一起與固相抗體和酶標(biāo)抗體，表現(xiàn)出假陽(yáng)性反響。雙抗體夾心法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，但不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能構(gòu)成兩位點(diǎn)夾心。
雙抗體夾心法的扼要操作步驟為：
1）先參加抗體，使抗體固定于載體外表；
2）再加樣品，使方針檢測(cè)抗原構(gòu)成抗原-抗體復(fù)合物；
3）加酶標(biāo)抗抗體（第二種動(dòng)物抗抗原的酶標(biāo)抗體）；
4）參加酶促反響底物，發(fā)作顯色反響，顯色的深淺與待測(cè)抗原的量成正比。
競(jìng)賽法檢測(cè)抗原
當(dāng)小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個(gè)以上的抗體位點(diǎn)，因而不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，能夠選用競(jìng)賽法形式。辦法的基本原理可見(jiàn)圖2，經(jīng)洗刷后分紅兩組：一組加酶符號(hào)抗原和被測(cè)抗原的混合液，而另一組只加酶符號(hào)抗原，再經(jīng)孵育洗刷后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測(cè)定的不知道抗原的量。小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。
競(jìng)賽法的扼要操作步驟：
1）先參加抗體，使抗體固定于載體外表；
2）參加梯度濃度份額的待測(cè)樣品與酶標(biāo)抗原混合物,一起做只加酶標(biāo)抗原的對(duì)照組；
3）參加酶促反響底物，發(fā)作顯色反響，比照實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的顯色區(qū)別，核算不知道抗原的量。
雙抗原夾心法檢測(cè)抗體
雙抗原夾心法的反響形式與雙抗體夾心法相似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶物，以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。與間接法測(cè)抗體的不一樣之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測(cè)定，因而其敏感度相對(duì)高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢測(cè)常選用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不一樣，尋覓適宜的符號(hào)辦法。
雙抗原夾心法的扼要操作步驟為：
1）先參加抗原，使抗體固定于載體外表；
2）再加樣品，使方針檢測(cè)抗體構(gòu)成抗原-抗體復(fù)合物；
3）加酶標(biāo)抗原；
4）參加酶促反響底物，發(fā)作顯色反響，顯色的深淺與待測(cè)抗體的量成正比。
間接法檢測(cè)抗體
間接法是檢測(cè)抗體常用的辦法。其原理為利用酶符號(hào)的抗抗體（辣根過(guò)氧化物酶符號(hào)的兔抗*抗體）以檢測(cè)與固相抗原的受檢抗體（*），故稱為間接法。本法首要用于對(duì)病原體抗體的檢測(cè)而進(jìn)行流行癥的確診。間接法的長(zhǎng)處是只需改換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體樹(shù)立檢測(cè)相應(yīng)抗體的辦法。
間接法的扼要操作步驟：
1）將特異性抗原與固相載體聯(lián)合，構(gòu)成固相抗原；
2）加稀釋的受檢血清，保溫反響。血清中的特異抗體與固相抗原，構(gòu)成固相抗原抗-體復(fù)合物；
3）加酶標(biāo)抗抗體；
4）參加酶促反響底物，發(fā)作顯色反響，顯色的深淺與待測(cè)抗體的量成正比。
競(jìng)賽法檢測(cè)抗體
競(jìng)賽法測(cè)抗體的反響形式與競(jìng)賽法測(cè)抗原相似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶物，以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。當(dāng)抗原材料中的攪擾物質(zhì)不易除掉，或不易得到滿足的純化抗原時(shí)，可用此法檢測(cè)特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)賽與固相抗原。標(biāo)本中抗體量越多，在固相上的酶標(biāo)抗體愈少，因而陽(yáng)性反響呈色淺于陰性反響。如抗原為高純度的，可直接包被固相。競(jìng)賽法測(cè)抗體有多種形式，可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競(jìng)賽，抗HBc ELISA通常選用此法。另一種形式為將標(biāo)本與抗原一同參加到固相抗體中進(jìn)行競(jìng)賽，洗刷后再參加酶標(biāo)抗體，與在固相上的抗原反響?？笻Be的檢測(cè)通常選用此法。
競(jìng)賽法的扼要操作步驟：
1）先參加特異性抗原，使抗原固定于載體外表；
2）參加梯度濃度份額的待測(cè)樣品與酶標(biāo)抗體混合物，并做只加酶標(biāo)抗體的對(duì)照組；
3）參加酶促反響底物，發(fā)作顯色反響，比照實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的顯色區(qū)別，核算不知道抗體的量。
捕獲包被法檢測(cè)抗體
捕獲包被法（亦稱反向間接法）ELISA，首要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測(cè)定。以現(xiàn)在zui常用的IgM測(cè)定為例，因血清中對(duì)于某種抗原的特異性IgM和IgG一起存在，則后者可攪擾IgM的測(cè)定。因而先將一切血清IgM（包含異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去掉IgG后再測(cè)定特異性IgM。IgM抗體的檢測(cè)用于流行癥的前期確診中。先用抗人IgM抗體包被固相，以捕獲血清標(biāo)本中的IgM（其間包含對(duì)于抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM）。然后參加抗原，此抗原僅與特異性IgM相。繼而加酶符號(hào)對(duì)于抗原的特異性抗體。再與底物作用，呈色即與標(biāo)本中的IgM成正相關(guān)。此法常用于病毒性感染的前期確診。類風(fēng)濕因子（RF）相同能攪擾捕獲包被法測(cè)定IgM抗體，致使假陽(yáng)性反響。因而中和IgG的間接法近期頗受喜愛(ài)，用這類試劑檢測(cè)抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。
捕獲法測(cè)抗體的扼要操作步驟：
1）特異性捕獲抗體的包被，先把能特異性待測(cè)抗原的抗體固定于固相載體外表；
2）參加待測(cè)樣品，通過(guò)固定在載體外表的對(duì)于該抗原的抗體固定于載體外表；
3）參加特異性抗原以及對(duì)于該特異性抗原的酶標(biāo)抗體；
4）參加酶促反響底物，發(fā)作顯色反響，顯色的深淺與待測(cè)抗體的量成正比。
ABS-ELISA法
除以上6種ELISA測(cè)試辦法外，近年在親和素-*體系上又發(fā)展出ABS-ELISA法 。親和素是一種糖蛋白，每個(gè)分子由4個(gè)能和*的亞基構(gòu)成，*為小分子化合物。用化學(xué)辦法制成的衍*-羥基琥珀酰亞胺酯可與抗體或酶構(gòu)成*符號(hào)產(chǎn)品，符號(hào)辦法較為簡(jiǎn)潔，并且不影響抗體或酶原有的生物學(xué)活性。親和素*體系，簡(jiǎn)稱ABS（avidin-biotin system）。由于親和素與*間的親和力*，敏捷，且極其安穩(wěn)，使BAS符號(hào)技能比常規(guī)酶聯(lián)免疫、放射免疫及熒光免疫技能有著更高的靈敏度，為微量抗原、抗體的檢測(cè)開(kāi)辟了新的路徑，大大提高了檢測(cè)的靈敏度，但該辦法比一般ELISA多用了兩種試劑，增加了操作步驟，因而在臨床檢驗(yàn)中ABS-ELISA使用不多。ABS-ELISA法可分為酶符號(hào)親和素-*（LAB）法和橋聯(lián)親和素-*（ABC）法兩種類型。兩者均以*符號(hào)的抗體（或抗原）代替原ELISA體系中的酶標(biāo)抗體（抗原）。
在LAB法中，將特異性抗體*化、酶分子符號(hào)在親和素分子上，*化抗體與被檢抗原后，再借BAS的高度親和力將酶分子聯(lián)合到抗原分子上，經(jīng)酶促反響即可檢出抗原，因而提高檢測(cè)的敏感度。
ABC法相同將特異性抗體*化、酶分子標(biāo)在*上，親和素和酶標(biāo)*需求先按一定份額構(gòu)成ABC復(fù)合物，這種網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)了很多的酶分子，當(dāng)親和素尚未被酶標(biāo)*飽滿時(shí)，*化抗體即可與之, 使被檢抗原、*化抗體和酶標(biāo)*聯(lián)成一體。
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