試驗(yàn)類型
ELISA試劑盒有多種類型，不過它們都有一個(gè)一起特色，就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲方式包含將抗原吸附到微孔板或許用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。
一般人們運(yùn)用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA試驗(yàn)，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間，這種方法既活絡(luò)又有用，受到了許多研究者的喜愛。不過有時(shí)候雙抗夾心法并不是好的挑選，例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著，又或許抗體只要一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。
在上述情況下，競賽性ELISA就更為適用，這種方法是選用帶符號(hào)的純化抗原與樣本中無符號(hào)的抗原進(jìn)行競賽，以結(jié)合捕獲抗體。
檢測方式
現(xiàn)在檢測ELISA試劑盒有許多途徑，我們能夠依據(jù)自己的偏好進(jìn)行挑選。一般ELISA檢測的是酶促反響的可溶性產(chǎn)物，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶（例如一般運(yùn)用的辣根過氧化物酶HRP），而反響系統(tǒng)中添加有相應(yīng)的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。
這種酶促反響生成具有特征性的色彩，能夠通過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶能夠結(jié)合在一抗上，也能夠結(jié)合在二抗上，還能夠運(yùn)用鏈霉親和素符號(hào)的酶與親和素符號(hào)的一抗結(jié)合。此外ELISA的成果檢測還包含放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。
抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如，關(guān)于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測有時(shí)更有協(xié)助。多抗能夠保證捕獲一切抗原，隨后單抗再特異性檢測具有特定抗原表位的抗原。
雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體（不管多抗仍是單抗）的配對很有考究。我們不期望捕獲抗體與檢測抗體競賽抗原上的同一位點(diǎn)，為此我們就需求保證捕獲抗體和檢測抗體所辨認(rèn)的抗原表位不存在重疊。
如果捕獲抗體和檢測抗體之間發(fā)生了沖突，就會(huì)對試驗(yàn)成果產(chǎn)生較大影響。要防止這一問題，我們能夠挑選購買“matched pair"的捕獲/檢測抗體對，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗(yàn)證才引薦的好組合。
穿插反響
如果抗體間發(fā)生沖突或穿插反響就會(huì)影響整個(gè)試驗(yàn)的特異性。其間抗體來歷所帶來的兼容性就是穿插反響的一個(gè)要素。雖然現(xiàn)在購買源自動(dòng)物的抗體越來越簡單，我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生穿插反響的問題。
在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA試劑盒檢測時(shí)，檢測用的二抗有必要特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反響。如果檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合，試驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。一般我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來防止上述問題。
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