一、ELISA試劑盒試驗目的
（1）學習一種判定氨基轉(zhuǎn)移作用的簡練方法及其原理；
（2）進一步掌握紙層析的原理和操作技能；
（3）了解氨基轉(zhuǎn)移作用在中心代謝中的意義。
二、試驗原理
氨基移換酶也稱轉(zhuǎn)氨酶,它能催化α-氨基酸的氨基與α-酮酸的α-酮基交換，這種作用稱為氨基移換作用。它在生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成與分解等中心代謝中，在糖、脂肪、蛋白質(zhì)三類物質(zhì)代謝的互相聯(lián)絡、互相轉(zhuǎn)化上，都起著很重要的作用。任何一種氨基酸進行轉(zhuǎn)氨作用時，都由其專心的轉(zhuǎn)氨酶催化。它們的zui適pH靠近7.4。在各種轉(zhuǎn)氨酶中，以*—草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶（簡稱谷草轉(zhuǎn)氨酶、GOT）及*—丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶（簡稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶、GPT）生機zui強。
三、ELISA試劑盒試劑與器材
解剖用具、離心機、恒溫水浴、干燥箱、臺秤、層析系統(tǒng)等。
1/15mol/L磷酸緩沖液（pH=7.4）、1%*溶液（用KOH中和至中性）、1%丙酮酸溶液（用KOH中和至中性）、0.1%碳酸氫鉀溶液、0.05%碘乙酸溶液、15%三氯醋酸溶液、標準*溶液(0.1%)、標準*溶液(0.1%)、0.1%水合茚三酮乙醇溶液、酚溶劑。
四、ELISA試劑盒操作方法
將兔擊暈，迅速解剖，取出肝臟，在低溫條件下剪碎。稱取勻漿后，離心取上清液，即為制備的酶液。體外氨基移換反應。紙上層析法檢查每人4個點（標準*溶液、標準*溶液、對照上清液、樣品上清液）。點樣放入層析罩內(nèi)。用被酚所飽滿的水溶液，平衡后，用帶小漏斗的玻璃管從層析罩上加飽合酚試劑25ml于層析缸內(nèi)。然后，當即蓋緊塞子，當溶劑前沿到達距濾紙上端約2.5cm處，取出濾紙，晾干或吹干，以除去酚溶劑，噴灑0.1%茚三酮乙醇溶液，放入烘箱中顯色氨基酸與茚三酮反應，在濾紙上呈現(xiàn)紫紅色斑斕。
五、ELISA試劑盒關(guān)鍵步驟與注意事項
① 取動物新鮮組織制備酶液，防止酶失活。
② 加碘乙酸克制酶解作用。
