人T淋巴細胞白血病細胞(A3)
細胞介紹：
A3亞克隆來自jurkat細胞系。用Fas抗體處理jurkat細胞，用有限稀釋法獲得一個細胞系，此細胞系
對Fas介導的凋亡產生自發(fā)抗性的比例較低。得到的亞克隆對Fas-介導的凋亡十分敏感。挑選對新霉
素具有抗性的野生型A3細胞，并三次 用移碼突變誘變劑ICR-191進行處理以分離具有抗Fas抗體殺傷
的隱性突變體。
細胞培養(yǎng)步驟：
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1.準備 RPIVM-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號 21875-091)，90%;優(yōu)質胎牛血清，10%。
2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
2)細胞處理：
復蘇細胞：將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在
1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶
中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢 查細
胞密度。
人T淋巴細胞白血病細胞(A3)細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-
0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若
細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶
補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻
。將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸
液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的 新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1: 2到1: 3的
比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄 去培養(yǎng)基后加入少量胰
酶，細胞變圓脫落后，加入約lml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加1〇%DMSO后進行凍存。懸
浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走)，加
入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入1〇%DMSO后進行凍 存。
注意事項：
收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢
液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
細胞特性：
1)來源：T細胞白血病，T淋巴細胞
2)形態(tài)：淋巴母細胞
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
人T淋巴細胞白血病細胞(A3)運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1)干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存
或直接復蘇；（2)存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細 胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具
體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途：僅供科研使用。
