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中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CTLA4Ig-24）-化學(xué)試劑

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

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更新時(shí)間：2017-07-25 15:23:27瀏覽次數(shù)：154次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
產(chǎn)地 國產(chǎn) 加工定制 是
適用領(lǐng)域 科研    

中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CTLA4Ig-24）是我公司重點(diǎn)推廣產(chǎn)品，我們有專業(yè)的技術(shù)人員全程指導(dǎo)，請(qǐng)放心購買，發(fā)貨時(shí)均會(huì)附上質(zhì)檢報(bào)告單、使用說明書和*用法用量，提供正規(guī)發(fā)票。

詳細(xì)介紹

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CTLA4Ig-24)
細(xì)胞介紹
CHO 細(xì)胞以人 CTLA-4 基因細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域序列和人IgCgamma1的絞鏈區(qū)，CH2和CH#區(qū)序列的融合結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)染，構(gòu)建了這株細(xì)胞。它們表達(dá)融合蛋白(CTLA4Ig)。

細(xì)胞特性
1）來源：中國倉鼠卵巢
2）形態(tài) ：可貼壁生長(zhǎng)（上皮細(xì)胞樣），也可懸浮生長(zhǎng)（圓球形）
3）含量：>1x10 6個(gè)/mL
4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5）規(guī)格：T25 瓶或者1mL凍存管包裝運(yùn)輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入*使用的培養(yǎng)基后至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CTLA4Ig-24)細(xì)胞用途：僅供科研使用。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一． 培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
培養(yǎng)條件：貼壁生長(zhǎng)時(shí)，選擇DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO31.5g/L, 添加0.2 mM*,0.001mM氨甲蝶呤)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。[MTX是基因DHFR產(chǎn)物的抑制物。當(dāng)培養(yǎng)基中存MTX時(shí)，MTX可滲入細(xì)胞內(nèi)與DHFR蛋白結(jié)合，使核苷酸的合成受阻。但是DHFR基因連同其附近幾千KB的DNA還會(huì)擴(kuò)增以滿足核苷酸合成的需要。理論上MTX濃度越大，DHFR基因擴(kuò)增越多，與 DHFR基因連鎖的目的蛋白基因也表達(dá)得越多]懸浮培養(yǎng)時(shí)，請(qǐng)使用懸浮生長(zhǎng)培養(yǎng)基，培養(yǎng)基為：EX-CELLCD-CHOCHOSerum-freeMedium,ChemicallyDefined(Sigma-Aldrich,貨號(hào)：24361C)添加物：L-*（Sigma-Aldrich,貨號(hào)：G8540-25G）Anti-ClumpingAgent(Gibco，貨號(hào)：01-0057AE)備注 ：CD-CHOCHOSerum-freeMedium請(qǐng)按照培養(yǎng)基配制說明書配制，L-*配制濃度為 200mM，工作濃度為8mM（即稀釋25倍，如500mlCHOSerumfreeMedium中添加20ml200mML-*，抗結(jié)團(tuán)劑使用為1%，即 500mlCHOSerum-freeMedium 中添加5ml抗結(jié)團(tuán)劑）
1）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
2）凍存液：90%*培養(yǎng)基（貼壁生長(zhǎng)凍存時(shí)或90%懸浮培養(yǎng)基（懸浮生時(shí)），10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二． 細(xì)胞 處理 ：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍
存。

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CTLA4Ig-24)注意事項(xiàng)：
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們。
2.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

關(guān)鍵詞：培養(yǎng)箱 顯微鏡

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