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中國倉鼠卵巢細胞（CHO-S）-化學(xué)試劑

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

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更新時間：2017-07-25 15:36:04瀏覽次數(shù)：147次

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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)地 國產(chǎn) 加工定制 是
適用領(lǐng)域 科研    

中國倉鼠卵巢細胞（CHO-S）是我公司重點推廣產(chǎn)品，我們有專業(yè)的技術(shù)人員全程指導(dǎo)，請放心購買，發(fā)貨時均會附上質(zhì)檢報告單、使用說明書和*用法用量，提供正規(guī)發(fā)票。

詳細介紹

中國倉鼠卵巢細胞(CHO-S)
細胞介紹
貼壁生長及懸浮生長均可（用于蛋白表達時，應(yīng)使用懸浮生長狀態(tài)，此時細胞生長狀態(tài)更好，比表面積更高，生物反應(yīng)器中的傳質(zhì)、傳熱效率更高，同時也可提高生物反應(yīng)器空間使用效率。工業(yè)上大規(guī)模生產(chǎn)單抗，重組蛋，大部分使用懸浮培養(yǎng)法來生產(chǎn)）

細胞特性
1來源：中國倉鼠
2形態(tài) ：成纖維細胞樣
3含量：>1x10 6 個/mL
4污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5規(guī)格：T25 瓶或者1mL凍存管包裝運輸和保存 ：可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

中國倉鼠卵巢細胞(CHO-S)細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養(yǎng)步驟
一． 培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）培養(yǎng)基信息：EX-CELLCD-CHOCHOSerum-free Medium,ChemicallyDefined(Sigma-Aldrich,貨號：24361C)添加物：L-*（Sigma-Aldrich,貨號：G8540-25G）Anti-Clumping Agent(Gibco，貨號：01-0057AE)備注 ：CD-CHO CHOSerum-freeMedium 請按照培養(yǎng)基配制說明書配制，L-*配制濃度為200mM，工作濃度為8mM（即稀釋25倍，如500mlCHOSerum-freMedium 中添加20ml200mML-*，抗結(jié)團劑使用為1%，即500mlCHOSerum-freeMedium中添加5ml抗結(jié)團劑）
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細胞處理 ：
傳代、轉(zhuǎn)染、建庫及實驗室規(guī)模小試方法：賽百慷（上海）生物技術(shù)股份有限公司提供的CHO-S細胞為已馴化的細胞，具有良好的適應(yīng)懸浮生長及適應(yīng)無血清培養(yǎng)基生長特性。
傳代方法：
1.10cm皿中培養(yǎng)：使用計數(shù)器（計數(shù)器或者血球計數(shù)板計數(shù)計數(shù)，接種密度為3×105個細胞/ml接種于提前37℃預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)基中（建議培養(yǎng)基取7-8ml，此時細胞生長狀態(tài)較好），置于搖床上生長，轉(zhuǎn)速為120-130rpm，濕度為70-80%，5%二氧化碳，溫度為37℃。
2.培養(yǎng)約2-3 天，細胞密度達到 1×106個活細胞/ml時，應(yīng) 1000rpm，25℃離心5min，離心后計數(shù)（此時應(yīng)稀釋），然后接種密度為3×105個細胞/ml接種于提前37℃預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)基中。細胞數(shù)目足夠時，可凍存。也可選擇125ml或者250ml搖瓶中培養(yǎng)細胞。（注意細胞培養(yǎng)液體積一般在總體積的五分之一，如在125ml搖瓶中加入25ml培養(yǎng)物，應(yīng)注意在搖瓶中培養(yǎng)細胞時應(yīng)將瓶蓋稍微擰松，以便于氣體交換，同時也不宜擰得過松，防止細胞污染）
轉(zhuǎn)染 方法：
在連續(xù)5代細胞密度未超過2×106個活細胞/ml時，可以使用 FreeStylaMax轉(zhuǎn)染試劑（Gibco，貨號：16447）在CDCHOSerum-freeMedium中直接轉(zhuǎn)染。（注
意：Anti-ClumpingAgent會干擾 FreeStyleMax轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率，同時也會干擾其他脂質(zhì)體型轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率）
建庫方法 ：
若需要建庫，可將細胞接種于125ml搖瓶中（接種密度為3×105個細胞/ml，總體積為25ml），此方法同樣適用于穩(wěn)定表達所需要蛋白的細胞株的建庫工作。建庫時，需要先建初級庫（master bank）（一般為10支，每支細胞總數(shù)不少于4.5×107個細胞），此步驟結(jié)束后，從凍存的初級庫中取出一支復(fù)蘇，按照同樣步驟建次級庫（working bank）（相同的，一般為10支，每支細胞總數(shù)不少于 4.5×10 7個細胞）。實驗室規(guī)模小試方法：將挑選出的穩(wěn)定細胞株從96孔板到24孔板到6孔板到 10cm皿中逐級擴大培養(yǎng)后（此時需要注意在培養(yǎng)過程中應(yīng)及時保種，以防止后續(xù)步驟出現(xiàn)污染，及應(yīng)對可能的表達量衰退現(xiàn)象）以 3×105個細胞/ml接種于125ml 搖瓶中，轉(zhuǎn)速為120-130rpm，溫度為 37℃，濕度為70-80%，連續(xù)培養(yǎng)一周，每天取樣做出相應(yīng)的細胞生長曲線，細胞活率曲線，蛋白表達曲線，可根據(jù)實際情況，每天取樣測出培養(yǎng)基中葡萄糖含量，以便決定是否要補加葡萄糖，同時可使用CHOFeedioreactorSupplement作為細胞發(fā)酵中補料，同時做出相應(yīng)的細胞生長曲線，細胞活率曲線，蛋白表達曲線，為中試放大補料添加做出合理數(shù)據(jù)支持。

中國倉鼠卵巢細胞(CHO-S)注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

關(guān)鍵詞：培養(yǎng)箱

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