當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>技術(shù)文章>>人源細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤判原因
人源細(xì)胞提供的對實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定說明是接種細(xì)菌于37℃培養(yǎng)24h,滴加V-P甲、乙液后在30min內(nèi)觀察結(jié)果,變紅色為實(shí)驗(yàn)陽性,不變色為陰性。然而在實(shí)際工作中,此方法會(huì)造成一些實(shí)驗(yàn)結(jié)果的誤判,并不是所有的細(xì)菌都適用上述判定方法。
V-P實(shí)驗(yàn)常用于細(xì)菌檢測,可檢驗(yàn)細(xì)菌利用葡萄糖產(chǎn)生中性乙酰甲基甲醇的能力,在堿性環(huán)境下,乙酰甲基甲醇被空氣中氧氣氧化成二乙酰,二乙酰與培養(yǎng)基內(nèi)蛋白胨中*所含有的胍基反應(yīng)可生成紅色化合物。
蠟樣菌V-P培養(yǎng)基培養(yǎng)24h,滴加甲、乙液后30min內(nèi)呈現(xiàn)陽性,證明試驗(yàn)用V-P培養(yǎng)基無質(zhì)量問題。單增菌V-P培養(yǎng)基分別于30℃和37℃培養(yǎng)24h、48h、72h、96h,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表。通過實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)兩種現(xiàn)象。其一,單增菌培養(yǎng)的時(shí)間短,出現(xiàn)陽性結(jié)果慢,隨著培養(yǎng)時(shí)間延長,陽性結(jié)果出現(xiàn)的時(shí)間縮短。其二,48h內(nèi),單增菌于30℃培養(yǎng)要比在37℃培養(yǎng)陽性結(jié)果出現(xiàn)的快些。
究其實(shí)驗(yàn)原理,V-P實(shí)驗(yàn)顯色不同于糖醇類培養(yǎng)基顏色變化,因其中所含指示劑變化特別靈敏。該實(shí)驗(yàn)zui終出現(xiàn)紅色物質(zhì)與二乙酰的含量有直接關(guān)系,二乙酰含量大,它與胍基生成的紅色物質(zhì)就多,觀察到培養(yǎng)基顯紅色的速度就快,二乙酰含量少則反之。試驗(yàn)中,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長,單增菌利用葡萄糖生成的乙酰甲基甲醇含量越來越多,乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰的含量也就越來越多,從而陽性結(jié)果顯現(xiàn)的時(shí)間隨之縮短。相對于37℃,單增菌于30℃培養(yǎng)更適宜生長,并且在相同的培養(yǎng)時(shí)間內(nèi),其利用葡萄糖生成的乙酰甲基甲醇含量更多些,尤其48h內(nèi)表現(xiàn)得更為突出。
從人源細(xì)胞大量的實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn),有些細(xì)菌的生化實(shí)驗(yàn)不應(yīng)*按照試劑盒說明書的方法去做,應(yīng)參考其生物學(xué)特點(diǎn),在必要時(shí)做出適當(dāng)?shù)恼{(diào)整,才能得到更加可信、滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。正如上述實(shí)驗(yàn),若按試劑盒提供的結(jié)果判定說明,培養(yǎng)72h內(nèi)的陽性結(jié)果均超過30min,理應(yīng)判定為陰性,而單增菌更適宜于30℃生長,且生長緩慢,從而V-P實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)?shù)难娱L培養(yǎng)時(shí)間,4h內(nèi)觀察結(jié)果為宜,所以不能輕易地判定為陰性。
40957-83-3 Glycitein 黃豆黃素標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
40246-10-4 Glycitin 黃豆黃甙標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
33996-58-6 Levetiracetam Racemic Mixture *外消旋混合物標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
N-Demethylazithromycin n-去甲基*標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
Neotame Related Compound A 紐甜相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
Open Ring Aztreonam 開環(huán)*標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
6233-83-6 Oxytocin Identification 羥可待酮鑒別標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
Piroctone Related Compound A 吡羅克酮相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
206184-49-8 Tenofovir 泰諾福韋標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
Tiagabine Related Compound A 噻加賓相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
3569/10/6 Valerenic Acid 纈草烯酸標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
32911-62-9 Withanolide A 睡茄交酯 A標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
人源細(xì)胞
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