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一、其它elisa免疫檢測(cè)試劑盒材料與試劑準(zhǔn)備
1. 材料:大腸桿菌。
2. 儀器:超凈工作臺(tái),培養(yǎng)箱,搖床,恒溫水浴鍋,臺(tái)式離心機(jī),取液器一套,低溫冰箱,冷凍真空干燥機(jī),電泳儀,水平電泳槽,紫外觀測(cè)儀。
3. 試劑:
(1)Solution I :25 mM Tris-Hcl(pH7.4),10 mM EDTA(pH8.0),50 mM葡萄糖,高壓滅菌,4℃保存。
(2)Solution II :0.2 M NaOH, 1%SDS 現(xiàn)配現(xiàn)用。
(3)Solution III :5 N KAc pH4.8,高壓滅菌,4℃保存。
(4)3 M NaAc PH5.2,高壓滅菌,4℃保存。
(5)異丙醇,*(8 mg/ml),酚,無水乙醇,70%乙醇,LB培養(yǎng)基,電泳試劑。
二、其它elisa免疫檢測(cè)試劑盒操作步驟
1. 細(xì)菌繁殖:LB培養(yǎng)基,2 ml/20ml,37℃,200 rpm,搖一搖,過夜。
2. 離心10 min,5 000 rpm, 4℃;棄上淸液。
3. 沉淀(菌體細(xì)胞)預(yù)冷的TES緩沖液洗滌,離心10 min,5 000 rpm, 4℃,加入預(yù)冷的1 ml Solution I,冰浴10 min。
4. 重新懸浮,加入150 ul*母液,室溫放置5 min。
5. 加入1.2 ml Solution II, 冰浴5 min。
6. 加入0.9 ml預(yù)冷乙酸鉀,混勻,離心10 min,12 000 rpm,4℃。
7. 加入1.5 ml異丙醇,-20℃冰箱內(nèi)放置15 min。
8. 離心10 min,12 000 rpm,4℃。
9. 取沉淀,懸于400 ul TE緩沖液中。
10. 加入40 ul,3 M NaAc。
11. 酚,抽提,乙醇沉淀。
12. 離心10 min,12 000 rpm,4℃。
13. 取沉淀,冷凍干燥,再懸浮于50 ul TE緩沖液中。
14. 電泳檢測(cè)提取DNA的質(zhì)量其它elisa免疫檢測(cè)試劑盒。
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