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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

 Sam 人可溶性粘附分子 規(guī)格： 48T/96T

 sPECAM-1 人可溶性血小板內皮細胞粘附分子1 規(guī)格： 48T/96T

 SFMC 人可溶性血纖蛋白單體復合物 規(guī)格： 48T/96T

 sVCAM-1 人可溶性血管細胞粘附分子1 規(guī)格： 48T/96T

 sEPCR 人可溶性血管內皮細胞蛋白C受體 規(guī)格： 48T/96T

 VEGFR-2/sFLK-1 人可溶性血管內皮生長因子受體2 規(guī)格： 48T/96T

 sAC 人可溶性腺苷酸環(huán)化酶 規(guī)格： 48T/96T

 sCKR 人可溶性細胞因子受體 規(guī)格： 48T/96T

 sICAM-1 人可溶性細胞間粘附分子1 規(guī)格： 48T/96T

 sTREM-1 人可溶性髓系細胞觸發(fā)受體-1 規(guī)格： 48T/96T

 sLR 人可溶性瘦素受體 規(guī)格： 48T/96T

 sPL-A2 人可溶性磷脂酶A2 規(guī)格： 48T/96T

 sRANKL 人可溶性核因子κB受體活化因子配基 規(guī)格： 48T/96T

GV3101（pSoup）電擊感受態(tài)細胞 50ul*10 sFASL 人可溶性凋亡相關因子配體 規(guī)格： 48T/96T

 sFAS/Apo-1 人可溶性凋亡相關因子 規(guī)格： 48T/

shēng huà shì jì 汞 容量： 100克

shēng huà shì jì 庚二酸 容量： 5克

shēng huà shì jì 鉻霧抑制劑 容量： 2～8℃ 1毫克

shēng huà shì jì 鉻酸銫 容量： RT，避光 5克

shēng huà shì jì 鉻酸鉛 容量： 25克

shēng huà shì jì 鉻酸鈉 容量： 100克

shēng huà shì jì 鉻酸鉀 容量： 保存：-20℃ 1克

shēng huà shì jì 鉻酸鋇 容量： RT 500毫升

shēng huà shì jì 鉻酸銨 容量： 1克

shēng huà shì jì 鉻片 容量： 1克

shēng huà shì jì 鉻粒 容量： 50克

96T

注意事項:

1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。