當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>感受態(tài)細(xì)胞>>克隆感受態(tài)細(xì)胞>> MG1655 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10-生命科學(xué)儀器
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更新時間:2019-09-20 16:36:28瀏覽次數(shù):222次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)DH5α 感受態(tài)細(xì)胞100ul*100-生命科學(xué)儀器
DH5α 感受態(tài)細(xì)胞100ul*20-生命科學(xué)儀器
JM109 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*20-生命科學(xué)儀器
Mach1-T1 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*100-生命科學(xué)儀器
Mach1-T1 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*20-生命科學(xué)儀器
購買客戶請先與我司細(xì)胞銷售人員核實訂購的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實驗操作。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | MG1655 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 |
包裝 | 100ul*10 |
分類 | 克隆感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
操作方法:
1. 從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
shēng huà shì jì * 容量: RT 25克
shēng huà shì jì 水合肼 容量: 10毫克
shēng huà shì jì 水飽和酚 容量: 0.25毫升
shēng huà shì jì 雙重酯酶染液 容量: 20片/箱
shēng huà shì jì 雙洗瓊脂平板 容量: 1米
shēng huà shì jì 雙岐桿菌生化基礎(chǔ)培養(yǎng)基 容量: 100克
shēng huà shì jì 雙岐桿菌BS培養(yǎng)基 容量: 100毫升
shēng huà shì jì 雙硫腙 容量: 500克
shēng huà shì jì 雙料乳糖膽鹽胨水 容量: RT 支
shēng huà shì jì 雙環(huán)己酮草酰二腙 容量: 500克
shēng huà shì jì 雙甘氨肽 容量: 100毫克
shēng huà shì jì 雙道定時鐘 容量: 保存:-20℃ 1克
shēng huà shì jì 雙丙氨膦 容量: 25克
shēng huà shì jì 雙吡唑酮 容量: 25克
shēng huà shì jì 雙[三(羥甲基)氨基甲烷] 容量: 5毫克
shēng huà shì jì 雙[三(羥甲基)氨基丙烷] 容量: 25毫克
shēng huà shì jì 曙紅Y(水溶) 容量: 100克
shēng huà shì jì 曙紅Y(醇溶) 容量: 100克
shēng huà shì jì 曙紅B 容量: 100克
shēng huà shì jì 鼠抗人雌激素受體單克隆抗體 容量: 10片/箱
shēng huà shì jì 疏水硅烷 容量: 保存:-20℃ 100u
shēng huà shì jì 叔丁基苯腈肟碳酸酯 容量: 保存:-20℃ 10毫克
shēng huà shì jì 叔丁醇 容量: 0.5毫升
shēng huà shì jì 嗜鹽菌選擇性瓊脂 容量: 500毫升
shēng huà shì jì 嗜酸粒細(xì)胞直接計數(shù)液 容量: 500克
MG1655 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10shēng huà shì jì 示蛋白胨(魚粉) 容量: 10克
shēng huà shì jì 石油醚 容量: 50
C3b 人補體片斷3b 規(guī)格: 48T/96T
C3b 人補體片斷3b 規(guī)格: 48T/96T
C3a 人補體片斷3a 規(guī)格: 48T/96T
C3bR 人補體片段3b受體 規(guī)格: 48T/96T
CCP 人補體調(diào)節(jié)蛋白 規(guī)格: 48T/96T
C4 人補體蛋白4 規(guī)格: 48T/96T
C3 人補體蛋白3 規(guī)格: 48T/96T
C7 人補體7 規(guī)格: 48T/96T
C3SP 人補體3裂解產(chǎn)物 規(guī)格: 48T/96T
C1INH 人補體1抑制物抗體 規(guī)格: 48T/96T
VN/CD51+CD61 人玻連蛋白/體外粘連蛋白 規(guī)格: 48T/96T
VIM 人波形蛋白 規(guī)格: 48T/96T
HCV-IgM 人丙型肝炎IgM 規(guī)格: 48T/96T
HCV-IgG 人丙型肝炎IgG 規(guī)格: 48T/96T
M2-PK 人丙酮酸激酶M2型同工酶 規(guī)格: 48T/96T
PK 人丙酮酸激酶 規(guī)格: 48T/96T
MDA 人丙二醛 規(guī)格: 48T/96T
ALT/GPT 人*轉(zhuǎn)氨酶/谷丙轉(zhuǎn)氨酶 規(guī)格: 48T/96T
CAPF 人表皮細(xì)胞活化肽因子 規(guī)格: 48T/96T
EGF 人表皮生長因子 規(guī)格: 48T/96T
EK 人表皮角蛋白 規(guī)格: 48T/96T
mIgM 人表面膜免疫球蛋白M 規(guī)格: 48T/96T
0克
注意事項:
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟:
1.取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2.待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘
4.每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5.根據(jù)實驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時。
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