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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

shēng huà shì jì * 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 放線菌肉湯培養(yǎng)基 容量： RT 支

shēng huà shì jì 紡錘菌素二鹽酸 容量： 100克

shēng huà shì jì 泛酸測定培養(yǎng)基 容量： 50張/盒

shēng huà shì jì 反玉米素核苷 容量： 25克

shēng huà shì jì 反玉米素 容量： 100克

shēng huà shì jì 反式芪 容量： RT 5克

Turbo 感受態(tài)細胞 100ul*10shēng huà shì jì 反式-2-己烯酸 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 反式-1,2-環(huán)己二胺四乙酸 容量： 100毫克

shēng huà shì jì 反丁烯二酸 容量： 2～8℃ 1克

shēng huà shì jì 凡士林 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 法尼醇 容量： 250毫克

shēng huà shì jì 發(fā)煙硝酸 容量： 25克

shēng huà shì jì 發(fā)煙硫酸 容量： RT，避光 10克

shēng huà shì jì 二正辛胺 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 二乙酸螢光素 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 二乙胺鹽酸鹽 容量： 2～8℃，避光 10毫克

shēng huà shì jì 二氧化錫 容量： RT 5克

shēng huà shì jì * 容量： 2～8℃ 250毫升

shēng huà shì jì 二氧化鉛 容量： 25毫升

shēng huà shì jì 二氧化錳 容量： 50克

shēng huà shì jì 二氧化硅 容量： 5克

shēng huà shì jì 二氧化鉑 容量： 500毫克

shēng huà shì jì 二糖酶測試盒 容量： RT 5個/包

shēng huà shì jì 二碳酸二叔丁酯 容量： 100毫克

shēng huà shì jì 二水氯化銅 容量： 50

 17-OHCS 人17羥皮質(zhì)類固醇 規(guī)格： 48T/96T

 16-α OHE-1 人16α羥基雌酮1 規(guī)格： 48T/96T

 15-LO/LOX 人15脂加氧酶 規(guī)格： 48T/96T

 12-HETE 人12羥二十烷四烯酸 規(guī)格： 48T/96T

 11-DH-TXB2 人11去氫血栓烷B2 規(guī)格： 48T/96T

 1,3-βD glucosidase 人1,3-βD葡葡糖苷酶 規(guī)格： 48T/96T

  OH 人1,25二羥基*3 規(guī)格： 48T/96T

 HIS 犬組胺 規(guī)格： 48T/96T

 TGF-β1 犬轉(zhuǎn)移生長因子β1 規(guī)格： 48T/96T

 MHC/DLA 犬主要組織相容性復合體 規(guī)格： 48T/96T

 PROG 犬孕激素/孕酮 規(guī)格： 48T/96T

 HBsAg 犬乙型肝炎表面抗原 規(guī)格： 48T/96T

 AChRab 犬乙酰*受體抗體 規(guī)格： 48T/96T

 ISR-β 犬胰島素受體β 規(guī)格： 48T/96T

 INS 犬胰島素 規(guī)格： 48T/96T

 FA 犬* 規(guī)格： 48T/96T

 TXB2 犬血栓素B2 規(guī)格： 48T/96T

 TpP 犬血栓前體蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 TM 犬血栓調(diào)節(jié)蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 Thymosin α1 犬*α1 規(guī)格： 48T/96T

 ICAM-1/CD54 犬細胞間粘附分子1 規(guī)格： 48T/96T

 VK1 犬*1 規(guī)格： 48T/96T

0毫克

注意事項:
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時應輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。