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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

 PAPP-A 小鼠妊相關血漿蛋白A 規(guī)格： 48T/96T

 HSF1 小鼠熱休克因子1 規(guī)格： 48T/96T

 HSP gp96 小鼠熱休克蛋白糖蛋白96 規(guī)格： 48T/96T

 HSP-90 小鼠熱休克蛋白90 規(guī)格： 48T/96T

 HSP-70 小鼠熱休克蛋白70 規(guī)格： 48T/96T

 Hsp-60 小鼠熱休克蛋白60 規(guī)格： 48T/96T

 Hsp-40 小鼠熱休克蛋白40 規(guī)格： 48T/96T

 HSP-27 小鼠熱休克蛋白27 規(guī)格： 48T/96T

 Hsp-20 小鼠熱休克蛋白20 規(guī)格： 48T/96T

 IMA 小鼠缺血修飾白蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 ALD 小鼠醛固酮 規(guī)格： 48T/96T

 i-PTH 小鼠全段甲狀旁腺素 規(guī)格： 48T/96T

 NA 小鼠* 規(guī)格： 48T/96T

 FK 小鼠趨化因子 規(guī)格： 48T/96T

 Hyp 小鼠羥* 規(guī)格： 48T/96T

 Pro-ANP 小鼠前心鈉肽 規(guī)格： 48T/96T

 Pro-ANP 小鼠前心鈉肽 規(guī)格： 48T/96T

 PSA 小鼠前列腺特異性抗原 規(guī)格： 48T/96T

 PAP 小鼠前列腺酸性磷酸酶 規(guī)格： 48T/96T

 PGF 小鼠前列腺素F 規(guī)格： 48T/96T

 PGE2 小鼠前列腺素E2 規(guī)格： 48T/96T

 PGE1 小鼠前列腺素E1 規(guī)格： 48T/9

DH5αλpir 感受態(tài)細胞 100ul*202-溴-5-氯吡啶 40473-01-6

2-溴-6-甲氧基吡啶 40473-07-2

4-氟并咪唑 405-50-5

4-(N,N-二甲氨基甲?；?苯硼酸 405520-68-5

2,4-二氟苯肼 40594-30-7

4-氯-2-羥基吡啶 40673-25-4

1-溴-4,4,4-三氟丁烷 406-81-5

1-溴-4-三氟甲氧基苯 407-14-7

(*基硅基)乙酸乙酯 4071-88-9

5-溴-3-氟吡啶 407-20-5

2-氟-6-甲基吡啶 407-22-7

三氟乙酸酐 407-25-0

醋酸甲脒 40730-91-7

4-羥基-1-茚酮 40731-98-4

3-巰基-2-丁酮 40789-98-8

對甲基苯磺酰異氰酸酯 4083-64-1

草酰乙酸二乙酯鈉鹽 40876-98-0

雙(*基硅烷基)氨基鉀 40949-94-8

4-甲氧基乙酰乙酸甲酯 41051-15-4

6T

注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。