林業(yè)菌種實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)的資料
1. 把聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì)電泳轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上。

1)轉(zhuǎn)移緩沖液洗滌凝膠和硝酸纖維素膜，將硝酸纖維素膜鋪在凝膠上，用5ml移液管在凝膠上來(lái)回滾動(dòng)去除所有的氣泡。

2)在凝膠/濾膜外再包一張3mm濾紙(預(yù)先用轉(zhuǎn)移緩沖液浸濕)，將凝膠夾在中間，保持濕潤(rùn)和沒(méi)有氣泡。

3)將此濾紙/凝膠/薄膜濾紙按照廠家建議方法放入電泳裝置中，凝膠面向陰極。

4)將上述裝置放入緩沖液槽中，并灌滿轉(zhuǎn)移緩沖液以淹沒(méi)凝膠。

5)按照廠家所示接通電源開(kāi)始電泳轉(zhuǎn)移。

6)轉(zhuǎn)移結(jié)束后，取出薄膜和凝膠，棄去凝膠。

2. 將薄膜漂在氨基黑中快速染色，直至分子量標(biāo)準(zhǔn)顯現(xiàn)時(shí)取出，記錄下標(biāo)準(zhǔn)位置。

3. 用100ml水洗滌纖維素膜，必要時(shí)可用脫色緩沖液。

4. 膜置印跡緩沖液中于37℃保溫1小時(shí)。

5. 室溫下，用PBS-Tween緩沖液洗滌薄膜。

6. 用封口機(jī)將薄膜封入塑料袋中，盡可能不留空氣。

7.袋的一角剪一緩沖液的小口，用透析袋夾緊。

8.混合：NGS(100微升)，印跡緩沖液中的抗體(10毫升)，加在裝薄膜的袋中，于室溫下?lián)u動(dòng)2小時(shí)(或4℃過(guò)夜)

9.用總體積300ml PBS-Tween緩沖液，分4次在一淺盤(pán)中洗滌薄膜，每次75ml。

10. 將連接*的羊抗兔IgG(40微升溶于10毫升印跡緩沖液/100微升 NGS)加在袋內(nèi)，于室溫下?lián)u動(dòng)1小時(shí)。

11.按步驟9洗滌。

12.加入抗生素(antibiotic)蛋白-HRP(40微升溶于10毫升印跡緩沖液/100微升 NGS)，于室溫下?lián)u動(dòng)。
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