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Annexin V-FITC/PI 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒50T使用說(shuō)明書

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更新時(shí)間:2017-07-03 13:58:16瀏覽次數(shù):586次

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Annexin V-FITC/PI 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒50T使用說(shuō)明書注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
Annexin V-FITC/PI 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒50T使用說(shuō)明書儲(chǔ)存條件:2-8℃避光保存。*保存于-20℃避光。

有效期:一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一,它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過(guò)程等方面起著十分重要的作用。在正常細(xì)胞中,磷脂酰*(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),而在細(xì)胞凋亡早期,細(xì)胞膜中的磷脂酰*(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi),巨噬細(xì)胞可以識(shí)別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的PS從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除,因此凋亡過(guò)程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng),而在細(xì)胞壞死的過(guò)程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kDCa2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與細(xì)胞凋亡過(guò)程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS高親和力特異性結(jié)合。PS外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂,DNA化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前,這使得AnnexinVPS的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測(cè)標(biāo)志事件。

Annexin V-FITC/PI 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒50T使用說(shuō)明書實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
我司Annexin V-FITC/PI 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒50T使用說(shuō)明書本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽(yù)*的宗旨,為客戶提供輕松便捷,安全可靠的網(wǎng)上采購(gòu)模式!我們將竭誠(chéng)為您服務(wù),咨詢
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15S-HEDE 100 ug     15S-xy7noxy-11Z13E-eicosadienoic acid; 15S-HEDE

α-difluorometxyl-DL-Arginine 10 mg     DFMA|RMI 71897 2-difluorometxylarginine

DEAC-dUTP 溶解于1 mM Tris緩沖液(pH 7。5     DEAC-dUTP 1 mM in Tris Buffer pH 75

Tricosanoyl Ethanolamide 5 mg     N-2-xy7noxyetxyl-tricos*; Tricosanoyl Ethanolamide

5Z),8Z),11Z-Eicosatrienoic Acid Ethanolamide 10 mg     N-2-xy7noxyetxyl-5Z,8Z,11Z-eicosatrienamide Mead Acid Ethanolamide; 5Z),8Z),11Z-Eicosatrienoic Acid Ethanolamide

1-     Dantrolene wo7ium
gp100 (619-627)Arg-Leu-Met-Lys-Gln-Asp-Phe-Ser-Val

α-Conotoxin SIATyr-Cys-Cys-His-Pro-Ala-Cys-Gly-Lys-Asn-Phe-Asp-Cys-NH2 (Disulfide bridge: Cys2 -Cys7,Cys3 - Cys13)

[Nle10]-Neurokinin A (4-10)Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leu-Nle-NH2

Biotin-MBP(94-102)Biotin -Ala-Pro-Arg-Thr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg

p60 v-src (137-157)Val-Ala-Pro-Ser-Asp-Ser-Ile-Gln-Ala-Glu-Glu-Trp-Tyr-Phe-Gly-Lys-Ile-Thr-Arg-Arg-Glu
Annexin V-FITC/PI 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒50T使用說(shuō)明書錄本ChlorobenzeneAR500mL

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L-Cysteine, xy7nochloride, Monohydrate100g

 

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