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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞凋亡檢測(cè)>> Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒100T售后服務(wù)
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更新時(shí)間:2017-07-03 14:01:08瀏覽次數(shù):278次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 儀表網(wǎng)procaspase-3激活劑200ul實(shí)驗(yàn)方法
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產(chǎn)品名稱:Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒100T售后服務(wù)
儲(chǔ)存條件:裂解緩沖液和檢測(cè)液室溫保存;其他-20℃避光保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
Caspase3活性檢測(cè)試劑盒(Caspase3ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測(cè)細(xì)胞或組織裂解液中Caspase3酶活性或純化的Caspase3酶活性的試劑盒。Caspase(Cysteine-requiringAspartateProtease)是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase3也稱CPP32、Yama或apopain,有時(shí)被寫作caspase-3或caspase3,屬于caspase家族的CED-3亞家族(CED-3subfamily),是細(xì)胞凋亡過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵酶。Caspase3是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中研究多的一個(gè)caspase。Caspase-3在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中,沒(méi)有活性;但在細(xì)胞發(fā)生凋亡階段,Caspase-3被激活,活化的Caspase-3由兩個(gè)大亞基和兩個(gè)小亞基組成,裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物,終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Caspase3可以剪切procaspase3、6、7和9,并可以直接特異性剪切許多caspase底物,包括PARP,ICAD,gelsolin和fodrin等。這些由caspase3介導(dǎo)的蛋白剪切是細(xì)胞凋亡分子機(jī)制的重要組成部分。
Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒100T售后服務(wù)使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測(cè)組織樣本。
Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒100T售后服務(wù)操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō),也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng),用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm,發(fā)射波長(zhǎng)647 nm,7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒100T售后服務(wù)實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
柚Citrus maxima Nootkatone 努特卡酮;諾卡酮,圓柚酮 4674-50-4 C15H22O ≥98%
棕櫚醋酯Pclmiticccidqthylqstqr68-97-720mg
鱧腸Eclipta prostrata alpha-Terthienylmetxanol alpha-三聯(lián)噻吩 13059-93-3 C13H10OS3 茶本海明(100120
中藥對(duì)照藥材路邊青121227-200503TLC法鑒別
Berbamine xy7nochloride*純度:≥98%
10191-41-0 維生素E標(biāo)準(zhǔn)品(250mg) 500mg
楊梅苷;楊梅甙;五羥基皇同-3-數(shù)李YangMeigan;YangMeidai;fivexy7noxyflavone-3-ShuLiMyricetriHPLC≥98%,20mg/支
Bi-linderone BI-LINDERONE 1227375-09-8
嘧啶并三唑類磺胺 標(biāo)準(zhǔn)品 號(hào):219714-96-2 1ml
人參皂苷 Rg4 126223-28-7 HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢
烈香杜鵑 Rhododendron anthopogonoides 1g
紫杉葉3-O數(shù)李基醋酯Rhamnusmetxylesteryewleaves3-O9838-67-3HPLC≥98%,20mg/vial
5,7-Dixy7noxy-6,8-dimetxoxyflavone 5,7-DIxy7noXY-6,8-DImetxOXYFLAVONE 3162-45-6
UV法含量測(cè)定D-葡萄糖醛酸140648-200602常溫,避光100mg
異佛手柑內(nèi)酯 Isobergapten 482-48-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
9(R)-HODE (50 ug) 9R-xy7noxy-10E,12Z-octadecadienoic acid; 9(R)-HODE
MA-CHMINACA (1 mg) AB-CHMINACA|AMB N-metxylcyclohexyl analog|MAB-AB-CHMINACA; metxyl (1-(cyclohexylmetxyl)-1H-indazole-3-carbonyl)-L-valinate
Annexin V-iFluor 350偶聯(lián)物 Annexin V-iFluor 350 conjugate
Docosaenoyl Ethanolamide (5 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-13Z-docosenamide; Docosaenoyl Ethanolamide
α-Linolenic Acid (1 g) 9Z,12Z,15Z-octadecatrienoic acid; ALA; α-Linolenic Acid
4-(3-Ethenyl-3,7-dimetxyl-1,6-octadienyl)pxenol Bakuchiol
G-QGly-Gln
α-Mating Factor (1-6)Trp-His-Trp-Leu-Gln-Leu
[Nle4,DPhe7] a-MSH, amide;Melanotan ⅠAc-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2
Biotin-Obestatin (human)Biotin-Phe-Asn-Ala-Pro-Phe-Asp-Val-Gly-Ile-Lys-Leu-Ser-Gly-Val-Gln-Tyr-Gln-Gln-His-Ser-Gln-Ala-Leu-NH2
P69 (522-534), M. lepraePro-Glu-Lys-Thr-Ala-Ala-Pro-Ala-Ser-Asp-Pro-Thr-
Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒100T售后服務(wù)錄本ChlorobenzeneAR500mL
G8140-5MLGoldview5ml0
CG5611-1Gγ-Globulins(From Bovine) γ-球蛋白(牛)9007-83-41g
2xPCRmix GC-Rich Master1ml(with Dye)
亮抑酶肽5mg
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