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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞凋亡檢測(cè)>> Caspase 9 活性檢測(cè)試劑盒100T免費(fèi)代測(cè)
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更新時(shí)間:2017-07-03 14:03:13瀏覽次數(shù):262次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)procaspase-3激活劑200ul實(shí)驗(yàn)方法
Caspase 4抑制劑200ul實(shí)驗(yàn)方法
產(chǎn)品名稱:Caspase 9 活性檢測(cè)試劑盒100T免費(fèi)代測(cè)
儲(chǔ)存條件:裂解緩沖液和檢測(cè)液室溫保存;其他-20℃避光保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
Caspase9活性檢測(cè)試劑盒(Caspase9ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測(cè)細(xì)胞或組織裂解液中Caspase9酶活性或純化的Caspase9酶活性的試劑盒。Caspase(Cysteine-requiringAspartateProtease)是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。線粒體釋放細(xì)胞色素c以后,caspase9可以和細(xì)胞色素c以及Apaf1形成復(fù)合物,同時(shí)被激活。激活的caspase9可以激活細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵酶caspase3,從而促進(jìn)后續(xù)的細(xì)胞凋亡信號(hào)。Caspase9的激活可以通過磷酸化進(jìn)行調(diào)控。本Caspase9活性檢測(cè)試劑盒是基于casepase8可以催化底物Ac-LEHD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA,pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收,從而可以通過測(cè)定吸光度來檢測(cè)caspase3的活性。本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測(cè)或容量不超過100μl的分光光度檢測(cè)杯檢測(cè),可用于培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織樣本的caspase-9檢測(cè)。
Caspase 9 活性檢測(cè)試劑盒100T免費(fèi)代測(cè)使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測(cè)組織樣本。
Caspase 9 活性檢測(cè)試劑盒100T免費(fèi)代測(cè)操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對(duì)于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng),用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm,發(fā)射波長(zhǎng)647 nm,7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
Caspase 9 活性檢測(cè)試劑盒100T免費(fèi)代測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
羽葉白頭樹Garuga pinnata Reynoutrin 槲皮素-3-D-木糖甙 549-32-6 C20H18O11 ≥95%
蟾毒靈BufclinHPLC≥98%,20mg/支
(R型)人參皂苷Rg3 20(R)Ginsenoside Rg3 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
中藥對(duì)照藥材地耳草121468-200401TLC法鑒別
Sweroside獐芽菜苷純度:98%
143-07-7 月桂酸標(biāo)準(zhǔn)品 500mg
3,29-二本酰基栝樓仁三醇3,29-twobenzoylTrichosanthesJenthreealcohol873001-24-810mg
2,4,5-Trimetxoxybenzdehyde 2,4,5-*氧基本甲全 4460-86-0
Verapamil Related Compound F維拉帕米相關(guān)物質(zhì)F標(biāo)準(zhǔn)品1993-3-8150mg維拉帕米相關(guān)物質(zhì)F標(biāo)準(zhǔn)品
丹參酮Ⅰ;Tanshinone I 568-73-0 20mg 訂購(gòu)|咨詢
光葉巴豆Croton laevigatus Taraxerone 蒲公英賽酮 514-07-8 C30H48O ≥98.5%
遠(yuǎn)華蟾蜍精Tqlocinobufcgin1947-6-420mg
蓮心減 Liensinine 2586-96-1 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
含量測(cè)定*100859-200501常溫,避光100mg
5-去甲川陳皮素 5-Demetxylnobiletin 2174-59-6 20mg HPLC≥98% 5-去甲川陳皮素 2174-59-6
溴化十六烷基shēng huà shì jì容量:2~8℃,避光500毫克
檸檬醋銨;檸檬醋三銨;檸檬三銨;枸櫞醋銨 TricMMoniuM citrctq 3428/7/8
2-Chloro-4-fluoropxenylhydrezine xy7nochloride 497959-29-2
2-甲基四氫噻吩-3-酮 2-Methyltetrahydrothiophen-3-one,≥97% 13679-85-1 1G 通用試劑
葡聚糖T40/葡聚糖D40/右旋糖酐40/Dextran T40 BR,分子量4萬 10克 Pharmacia 17-0270-01
3-基酚100毫克保存:-20℃
7440-55-3鎵GalliuM
DL-焦谷酸100克
2,3-二基 2,3-Diaminopyridine,95% 452-58-4 1G 通用試劑
*KH570/3-(異丁烯酰氧)丙基*氧基硅烷/3-(甲基丙烯酰氧)丙基*氧基硅烷/*基硅烷丙基丙烯酸脂/MEMO BR,98% 1公斤 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
Caspase 9 活性檢測(cè)試劑盒100T免費(fèi)代測(cè)微量可調(diào)移液器P1000 支 Gilson原裝
OCTYL-THIOGLUCOSIDE辛基-β-D-硫代葡萄糖苷超純級(jí)白色固體FRZsigma
聚烯亞安 50% in water POLYqTHYLqNqIMINq, BRcNCHqD 900-98-6
乙醛脫氫酶/Aldehyde Dehydrogenase, potassium-activated BR,2u/mg 25U 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
反式-1,2-環(huán)己二胺四乙酸/反-1,2-環(huán)己二胺-N,N,N,N-四乙酸/1,2-環(huán)己二胺四乙酸/反式-1,2-二基
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