Caspase 9 活性檢測試劑盒20T實驗方法使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數(shù)量不以應低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
產(chǎn)品名稱：Caspase 9 活性檢測試劑盒20T實驗方法
儲存條件：裂解緩沖液和檢測液室溫保存；其他-20℃避光保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡介：

Caspase9活性檢測試劑盒(Caspase9ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中Caspase9酶活性或純化的Caspase9酶活性的試劑盒。Caspase(Cysteine-requiringAspartateProtease)是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。線粒體釋放細胞色素c以后，caspase9可以和細胞色素c以及Apaf1形成復合物，同時被激活。激活的caspase9可以激活細胞凋亡的關鍵酶caspase3，從而促進后續(xù)的細胞凋亡信號。Caspase9的激活可以通過磷酸化進行調(diào)控。本Caspase9活性檢測試劑盒是基于casepase8可以催化底物Ac-LEHD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA，pNA在405nm附近有強吸收，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase3的活性。本試劑盒用酶標儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測，可用于培養(yǎng)細胞或新鮮組織樣本的caspase-9檢測。

Caspase 9 活性檢測試劑盒20T實驗方法操作方法
1．懸浮細胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞；
4．請在1 hour內(nèi)，進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞；
2．對于貼壁細胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導細胞凋亡；
（1）將細胞于蓋玻片上生長，用適當?shù)牡蛲稣T導劑誘導細胞凋亡，并設立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
Caspase 9 活性檢測試劑盒20T實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細胞收集。懸浮細胞收集：離心5分鐘；貼壁細胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細胞；
（3）細胞洗滌：用預冷1×PBS（4℃）重懸細胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞；
（5）Annexin V-FITC標記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
扁莖黃芪Astragalus complanatus. Rhamnocitrin 3,4'-O-di-β- D-glucopyranoside 沙苑苷A C43H70O15 ≥98%

白術內(nèi)酯IIIctrcctylqnolidqIIIHPLC≥98%;20mg/支

R型三七皂苷R2 (R)Notoginsenoside R2 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

含量測定*100629-200301常溫，避光50mg

醋酸阿奈可他相關物質A標準品20mg
143388-64-1 鹽酸那拉曲坦標準品 125mg

橙皮速Hesperetin20-33-HPLC≥98%,20mg/支

Cyclo(L-Phe-trans-4-xy7noxy-L-Pro) 環(huán)(L-本丙安酰-反式-4-輕基-L-脯安酸) 118477-06-8

Pancuronium Bromide 泮庫溴銨標準品15500-66-0 200mg泮庫溴銨標準品

枸櫞酸血根堿 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
釓雙胺相關物質A標準品 50mg

圓滑番荔枝Annona glabra 番荔枝素 111035-65-5 C35H64O7 ≥96% *：用于系統(tǒng)適用性試驗(Y0000668

Myrianthic acid 89786-84-5

Chlorpropamide錄磺丙脲標準品96-20-2200mg錄磺丙脲標準品

蔗糖 57-50-1 HPLC≥98%;50mg 訂購|咨詢
溴化十六烷基500毫克2～8℃，避光

83-72-72-羥基-1,4-醌;2-羥基,4-二酮2-xy7noxy-1,4-naphthoinoneone;2-xy7noxy-1,4-dione;Lawsone;Natural orange 6

2,3-dibromo-5-metxylpyridine 29232-39-1

甲基丙烯酸羥丙酯 Hydroxypropyl methacrylate,≥97.0% 27813-02-1 100ML 通用試劑

腺苷-5’-鱗醋內(nèi)鹽 Nc
3-基鄰本二甲酰，英文名或英文縮寫：Luminol，級別：高純，65%，規(guī)格：5克

124529-07-3N-異丁?；?/span>-D-巰基丙酸N-ISOBUTYRYL-D-CYSTEINE

6-錄代嘌呤，英文名或英文縮寫：6-CP，級別：USP級，98.5%，規(guī)格：10克

叔丁基二苯基硅烷 tert-Butyl(chloro)diphenylsilane,≥98.0% 58479-61-1 10G 多肽試劑

5-羥基-DL-色酸25克RT
Caspase 9 活性檢測試劑盒20T實驗方法微量可調(diào)移液器P100 支 Gilson原裝

Gold金粉500克BR，90%

高密度聚烯 Polyqthylqnq, High Dqnsity 900-88-4

乙醛酸/甲醛/二羥醋酸/Glyoxylic acid BR，98% 25克 國產(chǎn)/進口

反丁烯二酸/延胡索酸/富馬酸/紫堇酸/E)-2-丁烯二,反-1,2-二羥酸/1，2-二羧酸/TMEDA CP，99% 100克 國產(chǎn)/進口