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細(xì)胞質(zhì)膜蛋白提取試劑盒50T免費(fèi)代測(cè)

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產(chǎn)品名稱:細(xì)胞質(zhì)膜蛋白提取試劑盒50T免費(fèi)代測(cè)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

膜蛋白承擔(dān)各種生物功能,在疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套,因此膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)制備膜蛋白樣品的方法是使用去污劑和表面活性劑增溶。去污劑處理會(huì)使膜蛋白喪失其天然結(jié)構(gòu),因而妨礙了膜蛋白的功能研究。

細(xì)胞質(zhì)膜蛋白提取試劑盒50T免費(fèi)代測(cè)使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請(qǐng) 離心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測(cè)組織樣本。
細(xì)胞質(zhì)膜蛋白提取試劑盒50T免費(fèi)代測(cè)操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)515min;
3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō),也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng),用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組;
2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm,發(fā)射波長(zhǎng)647 nm,7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
細(xì)胞質(zhì)膜蛋白提取試劑盒50T免費(fèi)代測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細(xì)胞;
3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS4)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細(xì)胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
5Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
6PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μLPI染色。
7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL1×Binding Buffer。
164656-23-9 度他雄胺標(biāo)準(zhǔn)品(N/A) 200mg

橙皇ⅣOrangeIV224-73-420mg

Grandifloroside GRANDIFLOROSIDE 61186-24-1

Cefotaxime wo7ium*鈉標(biāo)準(zhǔn)品64485-93-4350mg*鈉標(biāo)準(zhǔn)品

白蠟樹(shù)精;Fraxinol 486-28-2 20mg 訂購(gòu)|咨詢
野漆樹(shù)苷 17306-46-6 檢測(cè)用對(duì)照品 漆葉甙

余甘子Phyllanthus emblica 20(29)-扇豆烯-3,23-二醇 32451-85-7 C30H50O2 98.5% 輕氧同位素標(biāo)準(zhǔn)水樣(G04401-04

Kaempferide491-54-3山柰素20mg/

Dichloralpxenazone CIV錄醛比林標(biāo)準(zhǔn)品480-30-8200mg

云南鐵杉Tsuga dumosa (-)-Epiafzelechin (-)-表阿夫兒茶精 24808-04-6 C15H14O5 98%
大鼠血管生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人細(xì)胞周期蛋白A1(CCNA1)免疫試劑盒 Human Cyclin-A1,CCNA1 ELISA kit

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Ratneutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGALELISA試劑盒大鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

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