當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>蛋白提取/檢測>> PMSF1ml實驗方法
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更新時間:2017-07-04 14:26:12瀏覽次數(shù):164次
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PMSF1ml實驗方法儲存條件:-20℃保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
PMSF采用進(jìn)口高品質(zhì)原料配制。濃度為200mM。PMSF為不可逆的*蛋白酶抑制劑,常用于蛋白提取過程中的抑制劑使用。可抑制羧肽酶Y,*,FactorXa,木瓜蛋白酶,纖溶酶,蛋白酶K,枯草桿菌蛋白酶,*及*等。PMSF在水溶液中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。
PMSF1ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
PMSF1ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill. Schisandrin C 五味子丙素 61301-33-5 C22H24O6 ≥98%
2,3,5,4-四羥基二本烯葡萄糖苷2,3,5,4-fourxy7noxytwostyrqnqglucosidqHPLC≥98%,20mg/支
長春花減;長春減 Vinblastine 865-21-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
含量測定鹽酸阿比朵爾100691-200401常溫,避光100mg
Poloxalene 泊洛
1713-07-1 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
頭翁 Pul-satilla chinensisRegel 23-輕基樺酸 85999-40-2 C30H48O4 ≥98% 托滅酸(Y000015
cis-3,4-Dixy7noxy-β-ionone 875666-39-0
錄雷他定相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品100643-71-8 15mg錄雷他定相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品
人參皂苷Rk2 HPLC≥95%;20mg 訂購|咨詢
三白草科植物蕺菜 (houtuynia sulfite)全草 wo7ium Houttuyfonate *鈉 1847-58-1 C12H23NaO5S ≥98%
柚皮苷Ncringin20mg/支
甘草查爾同A Licochalcone A 58749-22-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
順式*100759-常溫,避光30mg
Oxacillin wo7ium 本唑西林鈉標(biāo)準(zhǔn)品7240-38-2 200mg
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子D(VEGF-D)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人細(xì)胞色素c氧化酶亞基5B,線粒體(COX5B)免疫試劑盒 Human Cytochrome c oxidase subunit 5B,mitochondrial(COX5B)ELISA kit
AMP含量測試盒 高效液相色譜法 50管/48樣
Ratnuclearfactor-κBp65,NF-κBp65ELISA試劑盒大鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanhumanlysosomal-associatedmembraneprotein2,HLAMP-2ELISA試劑盒人溶酶體相關(guān)膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanmajorhistocompatibilitycomplexⅢ,MHCⅢ/HLA-ⅢELISAKit人主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠6酮前列腺素(6-K-PG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat cytochrome P450 (CYP450) ELISA Kit 大鼠細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒
Human8-isoprostaglandin,8-iso-PGELISAKit 人8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanComplementfragment3b,C3bELISA試劑盒人補(bǔ)體片斷3b(C3b)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織EINKINASE1δ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
Humanprotocadherin1,PCDH1ELISAKit人原鈣黏素1(PCDH1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
PMSF1ml實驗方法人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)Elisa試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人可溶性凋亡相關(guān)因子配體(sFASL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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