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Annexin V-PE / 7-AAD 細胞凋亡檢測試劑盒50T使用說明書

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更新時間:2017-07-06 08:45:50瀏覽次數(shù):485次

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Annexin V-PE / 7-AAD 細胞凋亡檢測試劑盒50T使用說明書BEL-7402(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2

CL-0093HCC1937(人癌細胞)5×106cells/瓶×2

IFNA14 Others Mouse 小鼠 IFNA14 / Interferon alpha-14 人細胞裂解液 (陽性對照)

HL細胞,*系 人組織細胞淋巴瘤細胞,U937細胞 小鼠B細胞雜交瘤細胞;W6/32

豚鼠皮膚細胞;GP-S2

CTSD Others Mouse 小鼠 Cathepsin D / CTSD 人細胞裂解液 (陽性對照)

Annexin V-PE / 7-AAD 細胞凋亡檢測試劑盒50T使用說明書使用注意事項
1.微量試劑取用前請 離心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
Annexin V-PE / 7-AAD 細胞凋亡檢測試劑盒50T使用說明書操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)515min;
3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡;
1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
2)用PBS洗滌細胞兩次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
5)避光、室溫反應(yīng)5 min
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
Annexin V-PE / 7-AAD 細胞凋亡檢測試劑盒50T使用說明書實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer
2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細胞;
3)細胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS4)重懸細胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細胞;
5Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
6PI標(biāo)記:上機前5分鐘再加入5μLPI染色。
7)上機前,補加200μL1×Binding Buffer。
小鼠雪旺細胞MSC

IL1R1 Others Rat 大鼠 IL1R1 / CD121a 人細胞裂解液 (陽性對照)

HBL-100 人整合 SV40基因的上皮細胞

CM-R099大鼠表皮黑色素細胞*培養(yǎng)基100mL

Saos-2,人成骨肉瘤細胞

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0927 人脂肪細胞*培養(yǎng)基 100mL
IGSF8 Others Human PGRL / IGSF8 人細胞裂解液 (陽性對照)

平滑肌細胞生長添加物SMCGS

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0906

CNE2細胞,人鼻咽癌細胞(低分化) 小鼠骨髓瘤細胞,P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]細胞 蚊源細胞

NCI-H1650(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2

Promocell C-24305 Melanocyte Growth Medium M2 (prf), 黑色素細胞生長培養(yǎng)基M2型套裝,無酚紅 500ml
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