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更新時間:2017-07-06 08:47:58瀏覽次數(shù):600次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)Annexin V Alexa Fluor647 / 7-AAD 細胞凋亡檢測試劑盒50T使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
Annexin V Alexa Fluor647 / 7-AAD 細胞凋亡檢測試劑盒50T使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
BSC-1(猴腎細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0029B16(小鼠黑色素瘤細胞)5×106cells/瓶×2
SMR3B Others Human 人 SMR3B 人細胞裂解液 (陽性對照)
H4細胞,人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞 人大動脈平滑肌細胞,HASMC細胞 正常大鼠腎細胞(EGF受體陽性);NRK49F
二氫*還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細胞;CHO/dhFr-
COMP Others Human 人 COMP 人細胞裂解液 (陽性對照)
人黑色素瘤細胞;A875
IL18RAP Others Cynomolgus 食蟹猴 IL18RAP 人細胞裂解液 (陽性對照)
人肝竇內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
LLC細胞,小鼠肺癌細胞 CHO(中國倉鼠卵巢細胞) 恒河猴肺細胞;RM-L1
PPBP Protein Rat 重組大鼠 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (Fc 標簽)
RAW 264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 FSTL1 人細胞裂解液 (陽性對照)
EFNA1 Others Rat 大鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 人細胞裂解液 (陽性對照)
臍動脈平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
大鼠輸尿管上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
OKT 11雜交瘤細胞抗CD2 OKT 11 hybridoma cells against CD2 IMDM培養(yǎng)基(GIBCO)+20%FBS
IGFBP4 Protein Human 重組人 IGFBP4 蛋白 (His 標簽)
HFF-1(人成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2 克雷伯肺炎桿菌
小鼠骨骼肌快肌肌鈣蛋白I(TNNI2)ELISA試劑盒 ,英文名: TNNI2 ELISA Kit
人血栓前體蛋白(TpP)ELISA檢測試劑盒Humanthrombusprecursorprotein,TpPELISAKit 96T/48T
大鼠酸性磷酸酶(ACP)免疫試劑盒 Rat Acid Phosphatase,ACP ELISA Kit
英文名稱RatglialfibrillaryacidicproteinELISAKit大鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISAKit規(guī)格:96T/48T
環(huán)境傷*B(SalmonellaParatyphiB)定量PCR擴增檢測試劑盒20次
ELISAKitTARC/CCL17人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子規(guī)格:48T/96T
小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human growth regulated oncogene alpha / melanoma growth stimulating factor (GRO alpha/CXCL 人生長調(diào)節(jié)致癌基因α/黑素瘤生激因子(GROα/CXCL
Humanpyruvatedehydrogenase-E1,PDHE1ELISAKit 人丙酮酸脫輕酶E1(PDHE1)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humananti-Qfeverantibody,anti-Q-AbELISA試劑盒人抗Q熱抗體(anti-Q-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物細胞色素C釋放凋亡檢測試劑盒(含抗體)10次
Humantumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,TRAIL-R3ELISAKit人壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體3(TRAIL-R3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Annexin V Alexa Fluor647 / 7-AAD 細胞凋亡檢測試劑盒50T使用說明書小鼠阿立新A(OrexinA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠γ基丁酸(GABA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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