當前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞氧化應(yīng)激>> 磷脂酶D檢測試劑盒-熒光法100T實驗方法
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更新時間:2017-07-07 12:00:43瀏覽次數(shù):141次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)磷脂酶D檢測試劑盒-熒光法100T實驗方法EB-3(人Burkitt淋巴瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
纖維母細胞粘附檢測試劑盒Fibro
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CL-0052Caki-1(人腎透明細胞癌細胞)5×106cells/瓶×2
HMEpC Pellet 人類上皮細胞團塊 > 1 mio.cells 人髓核細胞cDNAHNPC cDNA
磷脂酶D檢測試劑盒-熒光法100T實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請 離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
磷脂酶D檢測試劑盒-熒光法100T實驗方法操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
磷脂酶D檢測試劑盒-熒光法100T實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
CM-H024人胰腺星狀細胞*培養(yǎng)基100mL
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BEL-7404(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M006小鼠肺成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL 人成骨肉瘤細胞;Saos-2
ITGA8 & ITGB1 Others Human 人 ITGA8 & ITGB1 Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照)
人毛細胞總RNAHHDPC tRNA
KYSE450 人食管癌細胞
CL-0328CEM/C1(人急性淋巴細胞白血病細胞)5×106cells/瓶×2
rEPC,大鼠內(nèi)皮祖細胞-骨髓
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