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更新時間:2017-07-07 12:04:46瀏覽次數(shù):153次
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*檢測試劑盒-比色法100T使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
*檢測試劑盒-比色法100T使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
HCC38(人導管癌細胞) 5×106cells/瓶×2
小氣道上皮細胞培養(yǎng)基SAEpiCM-prf
CD27 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD27 / TNFRSF7 人細胞裂解液 (陽性對照)
Hela P10s-11F細胞,人細胞 小鼠神經母細胞瘤細胞與大鼠膠質瘤細胞之融合細胞,NG108-15細胞 支氣管平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CM-M068小鼠腎小管平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
hPC-PL Pellet 人胎盤周細胞團塊 > 1 mio.cells 人前列腺平滑肌細胞總RNAHPSMC tRNA
人尿道上皮細胞RNAHUC miRNA5 μg
FLT3LG Others Mouse 小鼠 FLT3L / Flt3 ligand 人細胞裂解液 (陽性對照)
人主動脈內皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
RM-1細胞,小鼠前列腺癌細胞 LoVo(結腸癌細胞) 人結直腸腺癌細胞;HCT 116 [HCT116]
CCL1 Protein Human 重組人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 (Fc 標簽)
SW480(人結腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 神經氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細胞裂解液 (陽性對照)
IL23 Others Human 人 IL-23A & IL-12B Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照)
人腦微血管內皮細胞cDNAHBMEC cDNA
B95-8 絨猴EBV轉化的白細胞
CL-0190RAW 264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)5×106cells/瓶×2
CSC, 小鼠心肌細胞
人胚腎細胞;293FT 人腎動脈內皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
大鼠細胞色素C(Cyt-C)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人*原C(PG-C)免疫試劑盒 human Pepsinogen C,PG-C ELISA Kit
酸性蛋白酶測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
RatPlaet-DerivedGrowthFactorAB,PDGF-ABELISA試劑盒大鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humaninsulin-likegrowthfactors1,IGF-1ELISA試劑盒人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanMetallothionein,MISAKit人金屬硫蛋白(MT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔子壞死因子相關凋亡誘導配體3(TRAIL-R3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat vascular endothelial cell growth factor receptor 2 (VEGFR-2) ELISA Kit 大鼠血管內皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2)ELISA試劑盒
Humansalivaryductautoantibody,SDAELISAKit 人抗唾液腺導管組織抗體(SDA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humancytokeratin18,CK-18ELISA試劑盒人細胞角蛋白18(CK-18)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織HPV7(HUMANPAPILLOMAVIRUS-7)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次
Humanplaet-associatedComplement3,PAC3ELISAKit人血小板相關補體3(PAC3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
*檢測試劑盒-比色法100T使用說明書人黑色素細胞抗體(MCAb)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人黑色素細胞刺激素(MSH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人黑色素瘤轉移表面黏附分子(MMSAM)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人黑色素瘤相關抗原(MAGE)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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