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更新時間:2017-07-10 11:50:37瀏覽次數(shù):191次
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組織蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
組織蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白
人牙周膜成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL
IL13RA1 Others Rat 大鼠 IL13RA1 人細胞裂解液 (陽性對照)
T6-Swiss albino細胞,小鼠胚胎成纖維細胞 B16(小鼠黑色素瘤細胞) 非洲綠猴腎細胞;BS-C-1
間充質(zhì)干細胞成骨細胞分化生長添加物MODS
HO-8910PM(人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞) 5×106cells/瓶×2 頜下腺上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
大鼠胸大動脈平滑肌細胞;A7r5
CSNK2A1 Others Mouse 小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
肺大靜脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
小鼠神經(jīng)干細胞(EGFP標記) 人肺癌細胞,NCI-H596[H596]細胞 NG108-15 [ 108CC15 ](小鼠神經(jīng)細胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤之融合細胞)
人肝癌細胞;SMMC-7721
IL7R Others Mouse 小鼠 IL7Ra / CD127 人細胞裂解液 (陽性對照)
LAMP2 Others Cynomolgus 食蟹猴 LAMP2 人細胞裂解液 (陽性對照)
人心肌細胞總RNAHCM tRNA
豚鼠胚胎細胞;104C1
AsPc-1細胞,人轉(zhuǎn)移胰腺癌細胞 人正常皮膚細胞,HaCaT細胞 小鼠T淋巴細胞;Cl.Ly1+2-/9
HSC-T6(大鼠肝星形細胞) 5×106cells/瓶×2
Gibco 17101015 Collagenase Type II 1g
小鼠二肽基肽酶9(DPP9)ELISA試劑盒 ,英文名: DPP9 ELISA Kit
人生長激素結(jié)合蛋白(GHBP)ELISA檢測試劑盒HumanGrowthHormoneBindingProtein,GHBPELISAKit 96T/48T
大鼠前列腺特異性抗原(PSA)免疫試劑盒 Rat prostate specific antigen,PSA ELISA Kit
英文名稱RatANCAELISAKit大鼠抗嗜中性粒細胞胞漿抗體(ANCA)規(guī)格:96T/48T
甲醛變性RNA垂直電泳全套試劑盒10次
人胃癌標志物ELISAKit人胃癌標志物ELISAKit,48T/96T人胃癌標志物ELISAKit,48T/96T規(guī)格:48T/96T
人中性粒細胞堿性磷酸酶(NAP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human lipoprotein associated phospholipase A2 (Lp-PL-A2) ELISA Kit 人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒
HumanMethylaseELISAKit 人甲基化酶(Methylase)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanHyaluronicacid,HAELISA試劑盒人透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織肌酐(CREATININE)化學(xué)比色法定量檢測試劑盒20次
HumanLipoxinA4,LXA4ELISAKit人脂氧素A4(LXA4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T實驗方法大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMAIgA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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