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一站式 DNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次運輸

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更新時間:2017-07-14 12:11:00瀏覽次數(shù):141次

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一站式 DNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次運輸使用方法 一、準備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

一站式 DNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次運輸產(chǎn)品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點: 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 RNA 進行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
一站式 DNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次運輸詳細介紹:

一站式 DNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次運輸使用方法:
一、準備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應效率)。但如果實驗條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
一站式 DNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次運輸后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M行放射自顯影。
大鼠胰島β細胞瘤細胞;RIN-m5F

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)

T-107A*(10mL酶解緩沖液)1mL

HEp-2細胞,人喉表皮樣癌細胞 人臍靜脈內(nèi)皮細胞,HUVE-12/CRL2480細胞 敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21

C2C12(小鼠成肌細胞) 5×106cells/瓶×2

CNTN1 Others Human CNTN1 / Contactin-1 人細胞裂解液 (陽性對照)
HSPA1A Others Human HSP70 / HSPA1A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人骨骼肌成肌細胞總RNAHSkMM tRNA

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS5A

NCI-H446[H446]細胞,小細胞肺癌細胞 人癌細胞系,ZR-75-30細胞 615小鼠T細胞性白血病瘤株;L7712

小鼠胚胎成纖維細胞(HNP抗性);HNP MEF(CF-1)

IL17RA Others Human IL17RA / CD217 人細胞裂解液 (陽性對照)
人骨骼肌成肌細胞總RNAHSkMM tRNA

HSPA1A Others Human HSP70 / HSPA1A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS5A

NCI-H446[H446]細胞,小細胞肺癌細胞 人癌細胞系,ZR-75-30細胞 615小鼠T細胞性白血病瘤株;L7712

小鼠胚胎成纖維細胞(HNP抗性);HNP MEF(CF-1)

IL17RA Others Human IL17RA / CD217 人細胞裂解液 (陽性對照)
Anti-PKB/FITC 熒光素標記蛋白激酶B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Bovine IgG (親和純化) IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 10mg

鼠抗人α 亞基人絨毛膜*單抗 Anti-α -HCG α ) 0.1ml

Dog IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的兔抗犬IgM抗體 0.1ml

FAM50A 英文名稱: FAM50A蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-RPS6KB1(Ser434) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體 規(guī)格 0.1ml

Bovine IgG (親和純化) IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 10mg
Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標記的小鼠抗兔IgM 0.1ml

Phospho-FoxO3a (Ser294) 英文名稱: 磷酸化叉頭蛋白3A抗體 0.1ml

c-mer原癌基因*激酶抗體 Anti-C-Mer/MERTK 0.1ml

Anti-P38 MAPK/FITC 熒光素標記原活化蛋白激酶p38抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PIM1 */*激酶蛋白Pim1抗體 規(guī)格 0.2ml

bovine-BSA/HRP 辣根過氧化物酶標記血清白蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
一站式 DNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次運輸CNTF 小鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

Anti-FGFR4/CD334 成纖維細胞生長因子受體4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Rabbit IgM/Bio *標記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格 0.1ml

MF/MPF(Human maturation promoting factor) ELISA Kit 人促有絲分裂因子 96T

Stanniocalcin 2 英文名稱: 斯鈣素2抗體 0.2ml

C22orf31 英文名稱: 22號染色體開放閱讀框31抗體 0.2ml

Anti-FGFR4/CD334 成纖維細胞生長因子受體4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

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