當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>RNA/DNA提取>>探針標(biāo)記及檢測產(chǎn)品>> Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL特點
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更新時間:2017-07-17 12:39:50瀏覽次數(shù):407次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL特點詳細(xì)說明書:
Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL特點使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液.
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時,請在第 8 步之后進(jìn)行。
Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL特點確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進(jìn)行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預(yù)雜交步驟 預(yù)雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進(jìn)行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點封閉,否則這些位點會吸附標(biāo)記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機(jī)將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時,延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動狀態(tài)中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL特點步驟:
1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機(jī)封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時間一般為 6-12 小時。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
大鼠胰腺再生蛋白Ⅳ(REG4)ELISA試劑盒 ,英文名: REG4 ELISA Kit
Mouse endocrine gland vascular endothelial growth factor (EG-VEGF) ELISA Kit 小鼠內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒
MouseTumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISAKIT 小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumancytovillin/ezrin,CVLELISAKit人細(xì)胞絨毛蛋白/埃茲蛋白規(guī)格:48T/96T
細(xì)胞ARG/ABL2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitC4a大鼠過敏毒素/補(bǔ)體片斷4a規(guī)格:48T/96T
小鼠腭/肺/鼻上皮癌關(guān)聯(lián)蛋白(PLUNC)ELISA試劑盒 ,英文名: PLUNC ELISA Kit
人血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)ELISA檢測試劑盒HumanfibrinopeptideA,FPAELISAKit 96T/48T
大鼠前列腺素E2合成酶(PGES)免疫試劑盒 Rat prostaglandin E2 synthase,PGES ELISA Kit
英文名稱RatSPE(IgG,M)ELISAKit大鼠抗抗體(SPE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
膠原蛋白酶消化試劑盒20毫升
ELISAKitVD2人維生素D2規(guī)格:48T/96T
小鼠黑色素細(xì)胞抗體(MC Ab)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat thioredoxin reductase (TrxR) ELISA Kit 大鼠硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA試劑盒
humanglutamicaciddecarboxylaseautoantibody,GAD-AbELISAKit 人*脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humananti-neutrophilgranulesantibody,ANGAELISA試劑盒人抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體(ANGA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物乳酸脫氫酶(LDH)總活性酶動力比色法定量檢測試劑盒20次
HumanUltraSensitiveProstateSpecificAntigen,PSAUSELISAKit人超敏前列腺特異性抗原(PSA-US)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
2-Arachidonoyl Glycerol-d5 (50 ug) 5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoic acid, 2-glycerol-1,1,2,3,3-d5 ester; 2-AG-d5; 2-Arachidonoyl Glycerol-d5
3,4,6-Tri-O-benzyl-β-D-Mannopyranose 1,2-(metxyl orthoacetate) (100 mg) 1,2-O-(1-metxoxyetxylidene)-3,4,6-tris-O-(pxenylmetxyl)-β-D-mannopyranose
mFluor Violet 510-標(biāo)記鏈霉親和素偶聯(lián)物 1 mg/ml mFluor Violet 510-streptavidin conjugate 1 mg/ml
Resolvin D2 metxyl ester (100 ug) 7S,16R,17S-trixy7noxy-4Z,8E,10Z,12E,14E,19Z-docosahexaenoic acid metxyl ester; RvD2 metxyl ester|7(S),16(R),17(S)-Resolvin D2 metxyl ester; Resolvin D2 metxyl ester
Linoelaidic Acid (1 g) 9E,12E-octadecadienoic acid; Linoelaidic Acid
2-nitno-5-thiobenzoic acid TNB
Glucagon-Like Peptide 1 (7-37)His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly
Z-F-R-AMCZ-Phe-Arg-AMC
[Lys0]-γ-1-MSH (41-58), amideLys-Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe-Gly-NH2
Biotin-BradykininBiotin-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg
Osteocalcin (45-49) (human)Phe-Tyr-Gly-Pro-Val
Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL特點月桂酸Lauric acidCP250g
CA1251-100mg腺苷3'',5''環(huán)磷酸37839-81-9100mg0
ER0402Eco105 I3000 units
Relax-ISO Blood DNA Kit II50ml(血量)
Janus green5g
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