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更新時(shí)間:2017-07-17 12:46:22瀏覽次數(shù):103次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)即用型封堵液 (Nylon )50mL保存使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液.
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時(shí),乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時(shí),請(qǐng)?jiān)诘?/span> 8 步之后進(jìn)行。
即用型封堵液 (Nylon )50mL保存確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進(jìn)行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預(yù)雜交步驟 預(yù)雜交就是用不含探針的超級(jí)雜交液跟印跡膜進(jìn)行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會(huì)非特異地吸附探針分子的位點(diǎn)封閉,否則這些位點(diǎn)會(huì)吸附標(biāo)記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤(rùn)。
2. 將濕潤(rùn)的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個(gè)小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級(jí)雜交液的比例沿小口 加入超級(jí)雜交液,然后用塑料封口機(jī)將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時(shí),延長(zhǎng)到 12-16 小時(shí)亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動(dòng)狀態(tài)中,使超級(jí)雜交液與印跡膜充分接觸。
即用型封堵液 (Nylon )50mL保存步驟:
1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計(jì)算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機(jī)封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測(cè)基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對(duì)于檢測(cè)克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時(shí)間一般為 6-12 小時(shí)。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
大鼠抑制素B(INH-B)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK/CXCL14)免疫試劑盒 Human Breast and kidney expressed chemokine,BRAK ELISA Kit
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性測(cè)試盒 紫外分光光度法 25管/24樣
RatlymphocytefactorELISA試劑盒大鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humangrowth-regulatedoncogeneγ/melanomagrowthstimulatingactivity,GROγ/MGSAELISA試劑盒人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因γ/黑素瘤生激因子(GROγ/CXCL3/MGSA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanLeptospiraIgG,LepIgGELISAKit人鉤端螺旋體IgG(LepIgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
大鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血清剝奪反應(yīng)相關(guān)蛋白(SDPR)免疫試劑盒 Human SDPR ELISA Kit
人抗紅細(xì)胞抗體(RBC)ELISA試劑盒 ,英文名: RBC ELISA Kit
RatInterferonα,IFN-αELISA試劑盒大鼠α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humangastrin-reliasingpeptide,GRPELISA試劑盒人胃泌素釋放多肽(GRP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInterleukin12,IL-12/P70ELISAKit人白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠骨保護(hù)素配體(OPGL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human orexin / orexin B (OX-B) ELISA Kit 人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA試劑盒
Humanpancreatickininogenase,PKELISAKit 人*(PK)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanAnti-Saccharomycescerevisiaeantibody,ASCAELISA試劑盒人抗釀酒酵母抗體(ASCA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物細(xì)胞周期S后期同步(SYNCHRONY)處理試劑盒10次
HumanTrypsinogen-2,Try-ⅡELISAKit人*原Ⅱ(Try-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
9(R)-HODE (50 ug) 9R-xy7noxy-10E,12Z-octadecadienoic acid; 9(R)-HODE
MA-CHMINACA (1 mg) AB-CHMINACA|AMB N-metxylcyclohexyl analog|MAB-AB-CHMINACA; metxyl (1-(cyclohexylmetxyl)-1H-indazole-3-carbonyl)-L-valinate
Annexin V-iFluor 350偶聯(lián)物 Annexin V-iFluor 350 conjugate
Docosaenoyl Ethanolamide (5 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-13Z-docosenamide; Docosaenoyl Ethanolamide
α-Linolenic Acid (1 g) 9Z,12Z,15Z-octadecatrienoic acid; ALA; α-Linolenic Acid
4-(3-Ethenyl-3,7-dimetxyl-1,6-octadienyl)pxenol Bakuchiol
G-QGly-Gln
α-Mating Factor (1-6)Trp-His-Trp-Leu-Gln-Leu
[Nle4,DPhe7] a-MSH, amide;Melanotan ⅠAc-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2
Biotin-Obestatin (human)Biotin-Phe-Asn-Ala-Pro-Phe-Asp-Val-Gly-Ile-Lys-Leu-Ser-Gly-Val-Gln-Tyr-Gln-Gln-His-Ser-Gln-Ala-Leu-NH2
P69 (522-534), M. lepraePro-Glu-Lys-Thr-Ala-Ala-Pro-Ala-Ser-Asp-Pro-Thr-
即用型封堵液 (Nylon )50mL保存錄本ChlorobenzeneAR500mL
G8140-5MLGoldview5ml0
CG5611-1Gγ-Globulins(From Bovine) γ-球蛋白(牛)9007-83-41g
2xPCRmix GC-Rich Master1ml(with Dye)
亮抑酶肽5mg
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