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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>RNA/DNA提取>>探針標(biāo)記及檢測(cè)產(chǎn)品>> 分子雜交爐1臺(tái)保存
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更新時(shí)間:2017-07-17 12:47:06瀏覽次數(shù):103次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)分子雜交爐1臺(tái)保存步驟:
1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計(jì)算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機(jī)封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測(cè)基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對(duì)于檢測(cè)克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時(shí)間一般為 6-12 小時(shí)。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
分子雜交爐1臺(tái)保存使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液.
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時(shí),乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時(shí),請(qǐng)?jiān)诘?/span> 8 步之后進(jìn)行。
分子雜交爐1臺(tái)保存詳細(xì)說明書:
分子雜交爐1臺(tái)保存確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進(jìn)行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預(yù)雜交步驟 預(yù)雜交就是用不含探針的超級(jí)雜交液跟印跡膜進(jìn)行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會(huì)非特異地吸附探針分子的位點(diǎn)封閉,否則這些位點(diǎn)會(huì)吸附標(biāo)記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤(rùn)。
2. 將濕潤(rùn)的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個(gè)小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級(jí)雜交液的比例沿小口 加入超級(jí)雜交液,然后用塑料封口機(jī)將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時(shí),延長(zhǎng)到 12-16 小時(shí)亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動(dòng)狀態(tài)中,使超級(jí)雜交液與印跡膜充分接觸。
大鼠抑制素βC(INHβC)ELISA試劑盒 ,英文名: INHβC ELISA Kit
Duck interleukin 6 (IL-6) ELISA Kit 鴨白介素6(IL-6)ELISA試劑盒
MousePlaet-DerivedGrowthFactorSolubleReceptorα,PDGFsR-αELISAkit 小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumandynamin2,DNM2ELISAKit人發(fā)動(dòng)蛋白2規(guī)格:48T/96T
細(xì)胞5-羥色胺-N-乙?;D(zhuǎn)移酶(SerotoninN-Acetyltransferase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
ELISAKitEPOR大鼠紅細(xì)胞生成素受體規(guī)格:48T/96T
大鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血漿抗凝蛋白S(PS)免疫試劑盒 Human PS ELISA Kit
人抗核小體抗體IgG(AnuA-IgG)ELISA試劑盒 ,英文名: AnuA-IgG ELISA Kit
RatInterferonγ,IFN-γELISA試劑盒大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanGelsolin,GSELISA試劑盒人凝溶膠蛋白(GS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInterleukin16,IL-16ELISAKit人白介素16(IL-16)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠*(GSH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human retinoic acid inducible gene /RIG-1 like receptor (RLR) ELISA Kit 人*誘導(dǎo)基因/RIG-1樣受體(RLR)ELISA試劑盒
HumanomentinELISAKit 人網(wǎng)膜素(omentin)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humananti-spermantibody,AsAbELISA試劑盒人抗抗體(AsAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物纖維二糖酶(cellobiase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
HumanTroponinT,Tn-ISAKit人肌鈣蛋白T(Tn-T)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
9(R)-HODE cholesteryl ester (50 ug) 9R-xy7noxy-10E,12Z-octadecadienoic acid, cholesteryl ester; 9(R)-HODE cholesteryl ester
SGI-1776 (10 mg) Pim-Kinase Inhibitor IX; N-[(1-metxyl-4-piperidinyl)metxyl]-3-[3-(trifluorometxoxy)pxenyl]-imidazo[1,2-b]pyridazin-6-amine
Annexin V-iFluor 647偶聯(lián)物 Annexin V-iFluor 647 conjugate
Nervonoyl Ethanolamide (50 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-15Z-tetracosenamide; Nervonoyl Ethanolamide
α-Linolenoyl Ethanolamide (5 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-9Z,12Z,15Z-octadecatrienamide; α-Linolenoyl Ethanolamide
Aerosporin; Mastimyxin Polymyxin B sulfate
GRF (free acid) (human)Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu
α-Melanocyte Stimulating Hormone, acetylated-[D-Val13] (11-13) (MSHa)Ac-Lys-Pro-D-Val-NH2
[Nle8’18,Tyr34]-pTH (7-34) amide (bovine)Phe-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Ser-Ser-Nle-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Tyr- NH2
Biotin-Parathyroid Hormone (1-34), humanBiotin-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe
PACAP (1-38), human, ovine, ratHis-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-Gly-Lys-Arg-Tyr-Lys-Gln-Arg-Val-Lys-Asn-Lys-NH2
分子雜交爐1臺(tái)保存本磺酰錄Benzenesulfonyl chlorideCP500mL
400ABTS1g0
LP0042-500GTryptone 胰蛋白胨73049-73-7500g
Tris-硼酸-EDTA 緩沖液500ml
L-谷安酰胺25g
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