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更新時(shí)間:2017-07-17 13:06:37瀏覽次數(shù):224次
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古細(xì)菌 + 真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 3100 次保存
dNTP 溶液,2.5mM5mL運(yùn)輸詳細(xì)說(shuō)明書:
dNTP 溶液,2.5mM5mL運(yùn)輸產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開(kāi)發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見(jiàn)使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
dNTP 溶液,2.5mM5mL運(yùn)輸變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94℃ 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過(guò) 95℃。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過(guò)高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
dNTP 溶液,2.5mM5mL運(yùn)輸DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過(guò)低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68℃之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C)%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 低 5℃,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒(méi)有必要。
dNTP 溶液,2.5mM5mL運(yùn)輸使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見(jiàn)下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見(jiàn)注) 72℃ 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
15(R)-15-methyl Prostaglandin E2 (1 mg) 9-oxo-11。alpha。,15R-dihydroxy-15-methyl-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; Arbaprostil|15(R)-15-methyl PGE2; 15(R)-15-methyl Prostaglandin E2
cis-tneme7ol (hydrochloride) (50 mg) CG 315|Contramal|NIH 10969|Tramal|Ultram|Zydol;
維生素B6(鹽酸吡哆醇)(100GM) Pyridoxine HCl, 58-56-0; ≥98%
4(Z),7(Z)-Decadienoic Acid-d5 (500 ug) (4Z,7Z)-deca-4,7-dienoic-9,9’,10,10,10-d5 acid; 4(Z),7(Z)-Decadienoic Acid-d5
SNAP (25 mg) N-(acetyloxy)-3-nitnosothiovaline; S-nitnoso-N-Acetyl-D,L-Penicillamine; SNAP
(2-Methyl-4-(((4-methyl-2-(4-trifluoromethylphenyl)-1,3-thiazol-5-yl)methyl)sulfanyl)phenoxy)acetic acid GW501516
PtdIns-(3)-P1 (1,2-dipalmitoyl) (ammonium salt) (500 ug) 1-(1,2-dihexadecanoylphosphatidyl)inositol-3-phosphate, diammonium salt; DPPI-3-P1; PtdIns-(3)-P1 (1,2-dipalmitoyl) (ammonium salt)
1-methyl-D-Tryptophan (1 g) 1-methyl-D-tryptophan
17(S)-HpDoHE (100 ug) 17S-hydroperoxy-4E,7Z,10Z,13Z,15Z,19Z-docosahexaenoic acid; 17(S)-hydroperoxy Docosahexaenoic Acid; 17(S)-HpDoHE
3-oxo Stearic Acid (1 mg) 3-oxo Octadecanoic Acid|β-keto Stearic Acid; 3-oxo-octadecanoic acid
S3I-201 (5 mg) 2-hydroxy-4-[[2-[[(4-methylphenyl)sulfonyl]oxy]acetyl]amino]-benzoic acid; NSC 74859; S3I-201
DiaEasy Dialyzer (10 ml) MWCO 12-14 kDa DiaEasy Dialyzer (10 ml) MWCO 12-14 kDa
13(S)-HODE (500 ug) 13S-xy7noxy-9Z,11E-octadecadienoic acid; 13(S)-HODE
LB 42708 (5 mg) [1-[[1-[(4-bromopxenyl)metxyl]-1H-imidazol-5-yl]metxyl]-4-(1-naphthalenyl)-1H-pyrrol-3-yl]-4-morpholinyl-metxanone
DiSC2(7) [3,3-Dietxylthiatricarboyenine iodide] DiSC2(7) [3,3-Dietxylthiatricarboyenine iodide]
Dibutyl-3-xy7noxybutyl Phosphate (1 mg) dibutyl 3-xy7noxybutyl esterdibutyl 3-xy7noxybutyl ester-phosphoric acid; TBP-OH; Dibutyl-3-xy7noxybutyl Phosphate
Stearoyl Ethanolamide (50 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-octadec*; Ceramid|Stearic Acid Ethanolamide; Stearoyl Ethanolamide
3β,14-Dixy7noxy-5β,20(22)-bufadienolide, 5β,20(22)-Bufadienolide-3β,14-diol Bufalin
HE瓊脂培養(yǎng)基23080250g用于沙門氏菌和某些志賀氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB/T4789.28-2003中4.22,GB/T4789.4-2003和SN...
乳糖肉湯 (CM0137) Oxoid incubation media 乳糖肉湯 (CM0137) Oxoid
清酒酵母 支/瓶
TrypticSoyFastGreenAgar
麥康凱瓊脂培養(yǎng)基 250g 用于腸道致病菌的選擇性分離培養(yǎng)
MycoplasmaBrothMedium
改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 250(g) incubation media 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 250(g)
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA) 250g 用于水或食品中大腸菌群平板菌落計(jì)數(shù)(GB 4789.3-2010和SN0169-92)。
四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基(TTB)用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)
產(chǎn)氣莢膜梭菌測(cè)定用培養(yǎng)基 250g 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離培養(yǎng)
dNTP 溶液,2.5mM5mL運(yùn)輸Fraser肉湯增菌液(FB)基礎(chǔ)26080250g用于李斯特氏的選擇性增菌培養(yǎng)(SN/T0-2005,ISO標(biāo)準(zhǔn))。
Baird-Parker 瓊脂基礎(chǔ) (CM0275) Oxoid incubation media Baird-Parker 瓊脂基礎(chǔ) (CM0275) Oxoid
沙門氏菌IV 支/瓶
接觸皿培養(yǎng)基250g用于生產(chǎn)環(huán)境的菌落總數(shù)檢測(cè)
EnrichmentbrothmediumE
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